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oylb

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生物学

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dcb005

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1楼 2013-08-29 21:18:21
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
oylb(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 09:26:02
楼主所有的样品都停在加样孔了,根本没有在胶上跑
理论上你的DNA应该是带负电荷, 因此应该能在胶上移动
怀疑是缓冲液的问题,你DNA用的缓冲液和阳性对照用的缓冲液一样吗?确认pH也一样吗?
最好能把跑胶的条件,包括电解缓冲液和你溶解DNA用的缓冲液的组分都列出来
目前先不要管蛋白的,先要让你的DNA能走出加样孔再说
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2013-08-30 07:06:02
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
oylb(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 09:25:49
oylb: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-30 09:48:16
图一探针没有跑好. 第一条跑道理论上没有蛋白, 所以无法从图一做EMSA的结论.
图二可以下结论, 楼主希望检测的shift还没有做出来, 因为加了竞争DNA的第三条跑到和第二条没有区别. 请问楼主加的竞争DNA的量有没有达到探针的100倍? 如果有甚至更高(这样竞争DNA绝对加足够了), 楼主就需要摸索蛋白和探针结合的条件, 调buffer, 调蛋白浓度..各种调.
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2楼2013-08-30 04:37:04
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oylb

禁言 (正式写手)
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4楼2013-08-30 09:47:40
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ZXWAN

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，我最近也在做EMSA，也用的这个试剂盒，和你加样的方式也一样，第一个孔只加探针，第二加目的基因和探针、第三个加目的基因、探针及竞争探针，但是我每次跑出来的带3个点样孔里的都一样，且都有3条带，这三条带中最大的那条和试剂盒里提供的阳性对照的探针带大小一样。不知道什么原因？你有遇到过这些问题吗？还有你认为什么什么原因？谢谢！
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5楼2013-09-02 15:42:31
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