应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时荧光定量PCR过程问题
52/1返回列表
查看: 4490  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

孙小爽

铁虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量PCR过程问题已有2人参与

用ABI7500在进行实时荧光定量时，退火温度一定要60℃吗？还是根据引物来？每次的结果都有黄色的三角符号出现在上面，是引物出现问题吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2013-08-28 17:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主这个退火温度肯定要根据你的引物来，如果在退火温度60度的时候依旧溶解曲线双峰有引物二聚体的时候，你仍旧需要提高退火温度。也可能是引物没有设计好，溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况，我们实验室用BIOGHC -PCR检测了DNA,如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现，这就证明没有非特异性扩增，且初始模板没有被污染；如果出现多个峰，估计是有非特异性扩增了或者初始模板被污染了。
赞一下 回复此楼
12楼2019-02-01 11:24:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-29 21:14:15
引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法，低的话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的。ABI没用过，第二个问题没法回答。
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
2楼2013-08-28 20:32:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙小爽

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2013-08-28 20:32:49
引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法，低的话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的。ABI没用过，第二个问题没法回答。

很感谢，还请问在realtime之前需要用引物和cDNA做一下常规pcr确定退火温度和引物可否适用吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-29 08:29:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 21:14:24
退火温度不一定是60度,根据引物来制定退火温度的.另外,如果可能,你的引物务必要在常规的pcr上实验下,确定退火温度以及最主要的是没有引物二聚体. 结果中出现了黄三角是因为你的产物出现了非特异性扩增,或者你的引物二聚体特别多.
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-08-29 08:44:38
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭