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孙小爽

铁虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 12.3
帖子: 29
在线: 10.3小时
虫号: 2166444
注册: 2012-12-04
性别: MM
专业: 植物病理学

[求助] 实时荧光定量PCR过程问题已有2人参与

用ABI7500在进行实时荧光定量时，退火温度一定要60℃吗？还是根据引物来？每次的结果都有黄色的三角符号出现在上面，是引物出现问题吗？

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1楼 2013-08-28 17:09:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

你是路人甲

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 232
散金: 42
帖子: 191
在线: 24.8小时
虫号: 13104654
注册: 2018-12-09
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

楼主这个退火温度肯定要根据你的引物来，如果在退火温度60度的时候依旧溶解曲线双峰有引物二聚体的时候，你仍旧需要提高退火温度。也可能是引物没有设计好，溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况，我们实验室用BIOGHC -PCR检测了DNA,如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现，这就证明没有非特异性扩增，且初始模板没有被污染；如果出现多个峰，估计是有非特异性扩增了或者初始模板被污染了。