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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时荧光定量PCR过程问题
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孙小爽

铁虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量PCR过程问题 已有2人参与

用ABI7500在进行实时荧光定量时，退火温度一定要60℃吗？还是根据引物来？每次的结果都有黄色的三角符号出现在上面，是引物出现问题吗？
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1楼 2013-08-28 17:09:54
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魔鬼的天使

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以看看这个帖子http://muchong.com/t-11567057-1
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自控，自信
11楼2018-03-14 16:17:44
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-29 21:14:15
引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法，低的话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的。ABI没用过，第二个问题没法回答。
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姥姥不疼，舅舅不爱
2楼2013-08-28 20:32:49
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孙小爽

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2013-08-28 20:32:49
引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法，低的话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的。ABI没用过，第二个问题没法回答。

很感谢，还请问在realtime之前需要用引物和cDNA做一下常规pcr确定退火温度和引物可否适用吗？
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3楼2013-08-29 08:29:28
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跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 21:14:24
退火温度不一定是60度,根据引物来制定退火温度的.另外,如果可能,你的引物务必要在常规的pcr上实验下,确定退火温度以及最主要的是没有引物二聚体. 结果中出现了黄三角是因为你的产物出现了非特异性扩增,或者你的引物二聚体特别多.
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4楼2013-08-29 08:44:38
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