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nfg123银虫 (正式写手)
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[求助]
蛋白质，荧光光谱，protein Fluorescence光谱，猝灭
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大家好，我看到文献好多都是研究药物或者小分子多蛋白质的荧光猝灭作用的，请问能不能用多糖等大分子与蛋白质结合后，使蛋白质荧光猝灭，能不能研究啊，谢谢，难道只能用小分子吗？ [ Last edited by nfg123 on 2013-8-26 at 13:35 ] |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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4楼2013-09-03 21:44:42
凌波丽
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【答案】应助回帖
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听不到: 金币+5, ACI+1, 解答详细，奖励ACI一枚 2013-09-03 09:59:01
nfg123: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-03 19:51:57
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nfg123: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-03 19:51:57
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对于蛋白质的荧光光谱变化，通过对已知结构的模型化合物的荧光光谱研究，得出了下列经验性规律： 1．当溶剂极性降低时，则Trp的荧光峰位(max)向短波长方向转动(蓝移)，而峰位上的荧光强度增加。 ①当蛋白质位于极性溶剂中时，如果峰位蓝移，那么，Trp残基一定位于蛋白质分子内部的疏水区； ②当蛋白质位于非极性溶剂时，如果峰位蓝移，那么，Trp残基位于蛋白质分子表面，或者由于溶剂诱导构象变化而把Trp残基带到蛋白质分子的表面。 2．如果荧光熄灭剂(如：I-、Cs+、硝酸盐，等)能熄灭Trp或Tyr残基的荧光，那么，此残基一定位于蛋白质分子的表面。如果熄灭剂不能熄灭Trp或Tyr残基的荧光，则有下列3种可能的原因： ①残基可能位于熄灭剂进不去的蛋白质分子内部，因而不能被熄灭； ②残基可能位于熄灭剂进不去的裂隙中：因而不能被熄灭； ③残基可能位于排斥熄灭剂的荷电区，因而不能被熄灭。例如：如果Trp残基位于负电区，带负电的碘离子(I-)就不能进入负电区，因而，不能熄灭Trp残基的荧光。 3．如果一种物质不能影响自由氨基酸的量子产率。但是，却影响厂蛋白质的荧光，那么，此物质一定使蛋白质分子发生构象变化。 4．Trp或Tyr残基，如果位于极性环境中，其量子产率随温度增加而下降，但在非极性环境中，则变化不大。因此，当量子产率不随温度增加而下降时，说明Trp残基所在的区域是非极性区。当蛋白质位于极性溶剂(如水)时：量子产率对温度的依赖性表明．蛋白质肽链是伸展的，许多Trp残基暴露到极性溶剂中。 5．如果Trp和Tyr残基的α-羧基是质子化的，则二残基的量子产率下降。 6．Trp残基的荧光能被邻近的质子化的酸性基团熄灭。因此，如果通过记录Trp残基的荧光而测出的pK值，与已知电离基团(如：His残基的咪唑基，或Cys残基的—SH基)的pK值相同，那么，此基团一定非常接近Trp残基：这一条规律只能应用于pH变化不导致构象变化的情况。 7．如果小分子与Trp残基相距很近，并且，前者的吸收光谱与后者的荧光光谱重叠，那么，此小分子便能使Trp残基的荧光熄灭。由此推论：如果与蛋白质分子相结合的小分子能熄灭Trp残基的荧光，那么，Trp残基一定位于或接近于结合部位。 根据上述经验性规律，应用荧光光谱法，可以作下列研究： ①蛋白质分子的构象变化； ②Trp或Tyr残基的微环境； ③蛋白质变性等。 如果蛋白质的本身的荧光光谱发生了变化，那么传递到Tb的能量肯定也就发生了变化，所以磷酸化后的蛋白质激发的Tb3+的荧光光谱的强度和波长都会有所变化。 另外如果涉及到能量转移的话，那么由于蛋白质的磷酸化后的构象发生了改变，所以其发出荧光的氨基酸残基与Tb3+的空间距离也就发生了改变，在能量转移的荧光的量子产率与能量转移的供体与受体的间距的（6次方+1）成反比关系。所以从能量转移的角度看，磷酸化后的蛋白质激发的Tb3+的荧光光谱的强度和波长都会有所变化。 用多糖等生物大分子与蛋白质结合后，使蛋白质荧光猝灭，就我所知是可以的，但是可能与常用的荧光淬灭的小分子的作用机理不同，而是通过多糖等生物大分子与蛋白质相互作用后改变了蛋白质的折叠状态，使得蛋白质的荧光集团的环境发生改变，而不再在发出荧光，最为明显的是：GFP，其发色团形成需要GFP折叠为天然构象，并且需要氧气，改变了其折叠状态，其发色团就会解体不再发出荧光了。多糖有些时候与蛋白质相互作用会影响蛋白质的重折叠或再折叠。 |
2楼2013-09-03 09:52:52
zhouxj
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3楼2013-09-03 15:42:04
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5楼2013-09-03 22:00:22
40