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dewdan

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCr

最近做连接时，菌落PCR的条带很浅，下面还有明显的引物二聚体，请问这是连上了还是没连上啊？菌落PCR条带会因为引物二聚体而导致目的条带浅吗？
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1楼 2013-08-23 20:55:42
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-24 02:06:56
菌落PCR检测只要有条带，就说明连接成功了，跟条带深浅没关系，与引物二聚体也没关系
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自主创业者，捣腾生物试剂
2楼2013-08-23 20:59:49
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fantasist001

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:07:09
如楼上所述，连上的可能性很大。
建议每次做都加上正负对照，确保剔假阳性。有时候非特异扩增也会的到相似大小的条带，虽然几率非常低。
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3楼2013-08-23 21:31:03
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:07:17
带上阳性对照和阴性对照啊
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4楼2013-08-23 21:38:37
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dewdan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fantasist001 at 2013-08-23 21:31:03
如楼上所述，连上的可能性很大。
建议每次做都加上正负对照，确保剔假阳性。有时候非特异扩增也会的到相似大小的条带，虽然几率非常低。

怎么对照呢？是用空载作对照么？
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5楼2013-08-24 13:22:05
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coca8831

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-08-26 18:41:06
1)应该是阳性的结果
2）加空载体和空白做阴性对照，试试
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勤奋的闲逛ing
6楼2013-08-24 16:12:16
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chenhuan987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 10:10:54
既然有条带，就是连上了，就是可能量比较少，再过培养一段时间就可以。引物二聚体经常会有，多多少少会影响实验结果，毕竟你的引物只有那么多，都成引物二聚体了，那个真正参与扩增的就少了
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7楼2013-08-25 17:32:59
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wangxue77

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-26 10:10:59
dewdan: 金币+2, 谢谢了，酶切证明是假阳性，唉 2013-08-28 15:08:41
dewdan: 金币+1, 谢谢，酶切没切开，应该是假阳性，唉… 2013-08-28 15:11:00
本帖内容被屏蔽
8楼2013-08-25 23:03:36
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lianfeng1107

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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dewdan(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 18:41:17
如1楼所说，只要在你的片段大小相应的位置有条带就初步可以说是转入成功了，如果加上对照那就更可以说明问题了。可以送去测序进一步证明是否成功。只要能P出片段，引物二聚体也无妨。
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9楼2013-08-26 10:29:39
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dl19891023

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-26 18:41:25
有可能是你在挑取菌落时挑到了旁边的琼脂，因为连接产物转化感受态时，要涂布菌液，那么有可能有线性质粒没转进去，而涂布到周围的琼脂上了，这样在挑取菌落做菌P时就会有浅的条带。我之前就是这样，在做菌P时最好用很尖的牙签稍微挑一点就好了，不要碰到琼脂
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10楼2013-08-26 12:52:13
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