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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » LIC cloning的具体步骤
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redx2011

银虫 (初入文坛)

[求助] LIC cloning的具体步骤

急求：LIC cloning 我把质粒用Ssp 1酶切之后，用T4聚合酶加入dGTP进行酶切半个小时，PCR产物也同样的用T4聚合酶加入dCTP进行酶切半个小时，后面要怎么处理？是要重沉之后混合在一起冰浴15min后电转至DH5α？还是如何处理，谢谢！！！求指教！
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大家一起努力
1楼 2013-08-20 11:08:23
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们线性化后两个冰裕混十分钟就直接DH5a了。。。。。本来就是切好的粘性末端嘛~重沉是什么意思？
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我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-08-20 14:02:03
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redx2011

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-08-20 14:02:03
我们线性化后两个冰裕混十分钟就直接DH5a了。。。。。本来就是切好的粘性末端嘛~重沉是什么意思？

重沉是为了出去T4聚合酶，如果T4聚合酶还有活性的话，质粒和目标片段混合后它会继续3-5‘的酶切，这样我感觉不好，所以有疑问。
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大家一起努力
3楼2013-08-21 11:51:49
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们T4反应是用PCR仪做的，最后有灭活的一步
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我会绕一个圈，走回到实验室
4楼2013-08-21 12:56:24
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