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雙子の殇

金虫 (正式写手)

[求助] 3500bp左右的片段回收不到,求指教~~

用RT-PCR扩增了以3500bp左右的片段,但是回收不到,或者回收到的DNA再扩增一下又没有条带了,这是怎么回事啊,求大神指教啊~~~附箘液鉴定的图,胶回收的图,用回收的DNA做PCR后的图。
3500bp左右的片段回收不到,求指教~~
ln20130811.jpghttp://bcs.duapp.com/emuchnet/2013/0818/w125h1216489_1376793697_451.jpg


3500bp左右的片段回收不到,求指教~~-1
ln20130806.jpg


3500bp左右的片段回收不到,求指教~~-2
ln20130818.jpg
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15879003030

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
雙子の殇: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-18 15:58:53
雙子の殇: 金币+3, ★★★很有帮助, 怪不得我用回收到的DNA直接跑胶能跑出来,但是P不出来,谢谢你~~~ 2013-08-18 16:00:38
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-18 17:18:23
首先你说明一下每张图是什么啊     第二说明一下marker多大,

第三,你是说你用回收的3500bp的片段再PCR一次,想得到更多的3500的目的片段么?这样一般是P不出来的,我也说不知道具体原因,我个人经验而言就是:用PCR产物去做模板只能P中间的序列,要想从头P到尾,肯定P不出东西。
2楼2013-08-18 11:57:07
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雙子の殇

金虫 (正式写手)

补充说明:
M:DL 10,000. 最亮的为2000,上面那条为4000
图的顺序有点混乱,图2:胶回收的图,右侧泳道;图1:克隆后的箘液PCR图,经测序发现全是载体片段;图3:右侧六个泳道,用不同浓度的回收DNA跑PCR 的图,没有条带,并且背景发白
3楼2013-08-18 16:06:06
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
雙子の殇: 金币+3, 好的,谢谢,我试试看 2013-08-19 17:31:58
你做第二次PCR的时候把模板稀释一下试试
4楼2013-08-18 17:32:55
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