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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 革兰氏阳性菌的PCR方法
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lvsihan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by caoying辉 at 2013-08-15 21:33:02
OD=0.5-0.6时，拿出来离心做菌体PCR

谢谢你！
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11楼2013-08-16 10:41:06
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lvsihan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by caoying辉 at 2013-08-15 21:33:02
OD=0.5-0.6时，拿出来离心做菌体PCR

菌体不需要破壁什么的吗？
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12楼2013-08-16 20:24:23
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coca8831

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-17 12:33:34
我是用摇24小时的菌液，不做任何处理直接取1微升直接进行PCR，应该没问题
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勤奋的闲逛ing
13楼2013-08-17 09:48:49
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lvsihan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by coca8831 at 2013-08-17 09:48:49
我是用摇24小时的菌液，不做任何处理直接取1微升直接进行PCR，应该没问题

可是我怎么做都做不出来，难道是我合成的引物有问题吗？
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14楼2013-08-22 09:41:49
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coca8831

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-22 19:52:00
抱歉没看清楚你用的菌种类，我用的是大肠杆菌（应该是革兰氏阴性）。挑克隆后摇菌过夜，然后取1微升的菌液，不做处理，直接进行PCR。和提取质粒后在进行PCR，阳性率稍微低一些，但基本差不多。PCR阳性的进行酶切，大约50%的可以切出来吧。

供你参考
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勤奋的闲逛ing
15楼2013-08-22 16:07:44
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by coca8831 at 2013-08-22 16:07:44
抱歉没看清楚你用的菌种类，我用的是大肠杆菌（应该是革兰氏阴性）。挑克隆后摇菌过夜，然后取1微升的菌液，不做处理，直接进行PCR。和提取质粒后在进行PCR，阳性率稍微低一些，但基本差不多。PCR阳性的进行酶切，大 ...

楼主是要从细菌基因组上克隆基因，不是做质粒阳性验证
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
16楼2013-08-22 21:19:56
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

菌落PCR的话对菌落大小没有要求，有菌就好。不过你是想克隆基因，强烈建议你提取基因组，然后再用高保真酶PCR。根据我的经验，在保真度上，用纯DNA做模板比菌落好很多！Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
17楼2013-08-22 23:10:48
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