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lvsihan

银虫 (正式写手)

[求助] 革兰氏阳性菌的PCR方法

实验需要克隆革兰氏阳性菌的某段基因,3000bp左右,想问一下如果直接使用菌落用于pcr的话,菌落长到多大比较合适呢?在pcr过程中有什么需要注意的吗?
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lvsihan

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by coca8831 at 2013-08-17 09:48:49
我是用摇24小时的菌液,不做任何处理直接取1微升直接进行PCR,应该没问题

可是我怎么做都做不出来,难道是我合成的引物有问题吗?
14楼2013-08-22 09:41:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 专家辛苦了 2013-08-13 17:19:13
直接使用菌落用于pcr的话,菌落长到你能挑取就行了,然后加30-50ul水煮沸个半小时左右,吸取少量上清直接做模板PCR。
2楼2013-08-13 10:39:43
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lvsihan

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-13 10:39:43
直接使用菌落用于pcr的话,菌落长到你能挑取就行了,然后加30-50ul水煮沸个半小时左右,吸取少量上清直接做模板PCR。

直接用菌落不处理可以吗?菌落大小的量对PCR结果有什么影响吗?
3楼2013-08-13 16:20:54
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莓林塔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-14 17:53:03
阳性菌的话还是进行下破壁处理吧,直接菌落P也许会出不来吧?先把菌落挑到10ulTE或水里然后反复煮冻几次然后把这10ul直接补齐到PCR体系里吧,注意洁净哦~
4楼2013-08-13 16:29:35
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