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meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心，不没于物

[求助] 自己搞定,谢谢大家

本人做的是骨骼肌组织，目的是观察核形态，确定死亡方式
要求回答者提供下列资料：
1.详细步骤
2.需要购买的试剂
3.注意事项以及实验个人心得

[ Last edited by meizhou on 2007-11-8 at 16:11 ]
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《memory》---BarbaraStreisand
1楼 2007-11-07 17:09:13
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边疆小鱼

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
meizhou(金币+5,VIP+0):不必了，以后还有很多生理病理专业问题请教您呢
谢谢.
不过,没帮上忙,还添麻烦,
我会请斑竹把金币还给你.
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9楼2007-11-07 20:09:26
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边疆小鱼

荣誉版主 (知名作家)
所有内容已发到你邮箱,若有不明白之处,可以联系我.
每个步骤都要严格操作,尤其是时间,一定要定好,不然就会影响后面的切片及染色.
骨骼肌,相对来说比较容易,
以下是我自己做切片选择的试剂:
固定剂:甲醛:水(1:20)
脱水:50%乙醇--12小时
       70%乙醇--12小时
       85%乙醇---4小时
       95%乙醇----2.30小时
        无水乙醇---2小时
透明:二甲苯一(30分钟
       二甲苯二(30分钟)
浸蜡与包埋:温度60度以下.具体操作请看邮件.
切片前,最好将做好的蜡块冷藏一下,切出来的片在比较容易展开.
切片的要点就是,要调整好蜡块,让整个面都被切到.
展开,我采用的是30%乙醇,切片时,将载波片置于加热器上,40度左右,滴30%乙醇于玻片,将切好的蜡片展到玻片即可.

[ Last edited by 边疆小鱼 on 2007-11-7 at 19:03 ]
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2楼2007-11-07 18:38:10
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meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心，不没于物
引用回帖:
Originally posted by 边疆小鱼 at 2007-11-7 18:38:
所有内容已发到你邮箱,若有不明白之处,可以联系我.
每个步骤都要严格操作,尤其是时间,一定要定好,不然就会影响后面的切片及染色.
骨骼肌,相对来说比较容易,
以下是我自己做切片选择的试剂:
固定剂:甲醛:水( ...

你给的这个网上有，这个是石蜡切片的
请看清楚后再回答 ...
赞一下 回复此楼
《memory》---BarbaraStreisand
3楼2007-11-07 19:13:14
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边疆小鱼

荣誉版主 (知名作家)
接上面
做好切片,放入烘箱使组织更好的固定在玻片,时间最好大于5小时.
染色步骤:
从烘箱取出切片,乘热依次放入:

二甲苯一(20分钟),

二甲苯二(20分钟),

无水乙醇(3-5分钟),
95%乙醇(3-5分钟),
85%乙醇(3-5分钟),
70%乙醇(3-5分钟)

以上步骤为脱蜡

水洗3-5分钟

苏木素(15分钟)

水洗一分钟

盐酸-酒精,小于30秒(注意,此段时间一定要控制好,时间太短,分化不完全,太长,细胞核的颜色也会褪去.

流水中冲洗40分钟,使细胞核的颜色返蓝.

95%乙醇一分钟.

伊红染色5分钟,
  
水洗一分钟,至颜色合适

晾干后,中性树胶封片.

[ Last edited by 边疆小鱼 on 2007-11-7 at 19:23 ]
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4楼2007-11-07 19:18:51
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