| 查看: 901 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
请帮帮我！从低熔点胶中回收BAC大片段≥20kb，但是重复三遍一点收获都没有%>_<% 已有2人参与
|
|||
|
我是个小白，请师哥师姐帮个忙啊……亚历山大现在在做一个BAC的亚克隆，提得质粒之后BamHI酶切，跑琼脂糖胶。 因为在上海的连续高温中，脆弱的低熔点胶不能完全固化，比果冻还脆弱，在师姐的建议下，我用普通胶去跑，之后再目的条带的下游挖去普通胶，在槽中灌入低熔点胶，之后继续电泳让条带进入低熔点胶里面。 然后切胶回收。 此时条带清晰明显，回收到的低熔点胶也可以在紫外灯下发出EB的荧光。 回收用的是琼脂糖酶，完全按照说明书上的protocol操作，先融化，后加酶消化琼脂糖，用异丙醇沉淀回收。 最后在离心管中见到了少量透明玻璃样的沉淀 参照师姐的建议，我只用12μl的TE溶解沉淀，取出其中的2μl跑胶验证。 可是最后却什么都没有得到！ 没有条带，甚至一点痕迹都没有！我已经重复了3遍了，连续将近一个月在大提BAC。每次都是好几个瓶子摇出来的，提到的BAC却不够我折腾一次的。到这一步走不下去了……请帮帮我！ 跪谢跪谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有300人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
3楼2013-08-04 13:36:46
Sthunder
木虫 (正式写手)
- 应助: 130 (高中生)
- 金币: 2337.8
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 308
- 在线: 176.6小时
- 虫号: 2551016
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-08-03 23:30:06
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2013-08-05 09:49:46
20