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宋立阳

新虫 (初入文坛)

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虫号: 2327625
注册: 2013-03-07

[交流] 请帮帮我！从低熔点胶中回收BAC大片段≥20kb，但是重复三遍一点收获都没有%>_<% 已有2人参与

我是个小白，请师哥师姐帮个忙啊……亚历山大现在在做一个BAC的亚克隆，提得质粒之后BamHI酶切，跑琼脂糖胶。
因为在上海的连续高温中，脆弱的低熔点胶不能完全固化，比果冻还脆弱，在师姐的建议下，我用普通胶去跑，之后再目的条带的下游挖去普通胶，在槽中灌入低熔点胶，之后继续电泳让条带进入低熔点胶里面。
然后切胶回收。
此时条带清晰明显，回收到的低熔点胶也可以在紫外灯下发出EB的荧光。
回收用的是琼脂糖酶，完全按照说明书上的protocol操作，先融化，后加酶消化琼脂糖，用异丙醇沉淀回收。
最后在离心管中见到了少量透明玻璃样的沉淀
参照师姐的建议，我只用12μl的TE溶解沉淀，取出其中的2μl跑胶验证。
可是最后却什么都没有得到！
没有条带，甚至一点痕迹都没有！我已经重复了3遍了，连续将近一个月在大提BAC。每次都是好几个瓶子摇出来的，提到的BAC却不够我折腾一次的。到这一步走不下去了……请帮帮我！
跪谢跪谢！！

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