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请帮帮我！从低熔点胶中回收BAC大片段≥20kb，但是重复三遍一点收获都没有%>_<% 已有2人参与
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我是个小白，请师哥师姐帮个忙啊……亚历山大现在在做一个BAC的亚克隆，提得质粒之后BamHI酶切，跑琼脂糖胶。 因为在上海的连续高温中，脆弱的低熔点胶不能完全固化，比果冻还脆弱，在师姐的建议下，我用普通胶去跑，之后再目的条带的下游挖去普通胶，在槽中灌入低熔点胶，之后继续电泳让条带进入低熔点胶里面。 然后切胶回收。 此时条带清晰明显，回收到的低熔点胶也可以在紫外灯下发出EB的荧光。 回收用的是琼脂糖酶，完全按照说明书上的protocol操作，先融化，后加酶消化琼脂糖，用异丙醇沉淀回收。 最后在离心管中见到了少量透明玻璃样的沉淀 参照师姐的建议，我只用12μl的TE溶解沉淀，取出其中的2μl跑胶验证。 可是最后却什么都没有得到！ 没有条带，甚至一点痕迹都没有！我已经重复了3遍了，连续将近一个月在大提BAC。每次都是好几个瓶子摇出来的，提到的BAC却不够我折腾一次的。到这一步走不下去了……请帮帮我！ 跪谢跪谢！！ |
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