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qi5451158lin

新虫 (初入文坛)

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[交流] 三步法DNA操作SOP

1. 将临床标本振荡混匀，伸入采集管底部吸取临床标本500μl至离心管，14,000rpm离心5分钟；
 沉降细胞
2. 将上清液倒入废液缸，取400μl溶液Ⅰ至离心管中，振荡混匀，进行100℃加热15分钟；
 溶液Ⅰ在低温下会有沉淀，必须先将溶液Ⅰ平衡至室温或45℃水浴使之沉淀溶解，混合均匀混匀后使用
 裂解细胞，释放DNA
3. 点动离心，加入400μl溶液Ⅱ，振荡混匀，静置2分钟；
 溶液Ⅱ为有机溶剂，使DNA从溶液中析出
4. 将离心管进行14,000rpm离心5分钟；
 沉降DNA
5. 将上清液倒入废液缸，14,000rpm离心1分钟min，用200μl移液枪器调到90μl量，轻轻的将剩余的上清液吸尽，枪头勿碰到离心沉淀壁，以免将DNA吸掉；开盖静置至少2 分钟；
 将有机溶液去除干净，避免有机溶剂干扰DNA在溶液Ⅲ中的溶解以及抑制后面PCR扩增
6. 加入60μl溶液Ⅲ，充分混匀，静置10分钟，14,000rpm离心1分钟；
 使DNA充分溶于溶液Ⅲ，离心沉淀非水溶性杂质
7. 将移液器枪枪头浸入液面2mm处，吸取上清液1μl加入分装好的PCR反应试剂中，混匀，点动离心，放入PCR仪中扩增。
 如不立即进行扩增，提取的DNA（步骤6后）可暂存于4℃冰箱，长期-20℃保存。

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1楼 2013-07-31 10:29:48

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