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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关半定量实验结果图片的问题！！切切！1
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学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 孙妙妙 at 2013-07-28 16:29:52
半定量是需要摸索循环数加样量及退火温度的，你内参的引物应该是没有问题的，但你那个亮度，一看就是超过阈值很多，一般内参22-26个循环最多了。我说的引物有问题的是你的目的基因引物，我们一般做出来都是只有1条 ...

你说的有道理   35个循环有点多  也是是引起非特异性的一个原因   非常感谢
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微生物小硕
11楼2013-07-28 17:05:00
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我看很多人都说了35个循环有点多,但是从楼主的图来看, 确实不多.再少估计就扩增不出来了.
引物的特异性应该是有问题的. 不知道你59度的结果怎么样, 如果不行 还是要调整PCR反映体系.不知道你用的是什么mix, 质量如何, 建议你换个系统试试看,mix 有时候挺差的.
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12楼2013-07-29 08:15:00
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学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-29 08:15:00
我看很多人都说了35个循环有点多,但是从楼主的图来看, 确实不多.再少估计就扩增不出来了.
引物的特异性应该是有问题的. 不知道你59度的结果怎么样, 如果不行 还是要调整PCR反映体系.不知道你用的是什么mix, 质量如 ...

59度  什么都没有  我都无语了
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微生物小硕
13楼2013-07-29 08:36:11
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 学术问题 at 2013-07-29 08:36:11
59度  什么都没有  我都无语了...

我觉得你可以换个酶试一下, 我用过的除了定量的mix,其他mix效果都不是很好,后来换用takara的extaq结果还不错,也比较稳定.
如果还不行,那酒只能换引物了.
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14楼2013-07-29 10:03:40
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
半定量首先调内参啊。然后再摸索各个基因的退火温度，循环数等。找做过的人问问。每个泳道都是啥东西，你没标出来。
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15楼2013-07-29 15:31:55
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