应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关半定量实验结果图片的问题！！切切！1
152/2返回列表上一页12
查看: 2099  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 孙妙妙 at 2013-07-28 16:29:52
半定量是需要摸索循环数加样量及退火温度的，你内参的引物应该是没有问题的，但你那个亮度，一看就是超过阈值很多，一般内参22-26个循环最多了。我说的引物有问题的是你的目的基因引物，我们一般做出来都是只有1条 ...

你说的有道理   35个循环有点多  也是是引起非特异性的一个原因   非常感谢
赞一下 回复此楼
微生物小硕
11楼2013-07-28 17:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我看很多人都说了35个循环有点多,但是从楼主的图来看, 确实不多.再少估计就扩增不出来了.
引物的特异性应该是有问题的. 不知道你59度的结果怎么样, 如果不行 还是要调整PCR反映体系.不知道你用的是什么mix, 质量如何, 建议你换个系统试试看,mix 有时候挺差的.
赞一下 回复此楼
12楼2013-07-29 08:15:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-29 08:15:00
我看很多人都说了35个循环有点多,但是从楼主的图来看, 确实不多.再少估计就扩增不出来了.
引物的特异性应该是有问题的. 不知道你59度的结果怎么样, 如果不行 还是要调整PCR反映体系.不知道你用的是什么mix, 质量如 ...

59度  什么都没有  我都无语了
赞一下 回复此楼
微生物小硕
13楼2013-07-29 08:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 学术问题 at 2013-07-29 08:36:11
59度  什么都没有  我都无语了...

我觉得你可以换个酶试一下, 我用过的除了定量的mix,其他mix效果都不是很好,后来换用takara的extaq结果还不错,也比较稳定.
如果还不行,那酒只能换引物了.
赞一下 回复此楼
14楼2013-07-29 10:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
半定量首先调内参啊。然后再摸索各个基因的退火温度，循环数等。找做过的人问问。每个泳道都是啥东西，你没标出来。
赞一下 回复此楼
15楼2013-07-29 15:31:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学术问题 的主题更新
152/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 【长期招聘】复旦大学 AI 制药实验室 博士后招聘 +3 第三种态度 2026-10-28 9/450 2026-11-02 13:06 by Grace_PepLib
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-02 12:25 by n0P4fnsXKbBK
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-02 09:29 by dcc2yOIRGGTT
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +3 iaeyuan 2026-11-01 3/150 2026-11-02 07:49 by kudofaye
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-02 06:20 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 06:13 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 13/650 2026-11-02 06:03 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 10/500 2026-11-02 06:00 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 21/1050 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 18/900 2026-11-02 05:37 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-02 05:34 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:27 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:24 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:48 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 22/1100 2026-11-01 16:35 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +9 zuesli 2026-10-27 15/750 2026-11-01 12:59 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭