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summer沙

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

做蛋白纯化后跑电泳,出来过一次单条带,在和mark跑的时候居然没有目的大小的单条带,而是大分子量的单条带了。这很奇葩啊,不太想从头开始了,拜托各位大神指导指导啊!求原因,求分析啊!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by summer沙 at 2013-07-26 15:39:43
查了大概20KD左右,是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。之前出来过一次目的单条带,但是老师觉得是胶被拉长了,跑啊下来了,所以才会出来的,我觉得这个几率也太小了吧!...

你纯化的是重组蛋白?带什么标签吗?表达产物的理论分子量计算是否有误?
5楼2013-07-26 22:34:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
分子量与理论值差多少?跑的是还原胶还是非还原胶?
2楼2013-07-26 01:07:16
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summer沙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 01:07:16
分子量与理论值差多少?跑的是还原胶还是非还原胶?

查了大概20KD左右,是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。之前出来过一次目的单条带,但是老师觉得是胶被拉长了,跑啊下来了,所以才会出来的,我觉得这个几率也太小了吧!
3楼2013-07-26 15:39:43
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你与marker差了多少,因为marker也是粗略估算,如果差的不是很多没有关系。你可否把你的PAGE图贴上啊,这样好分析,目前听你的描述,我有疑问:之前有单一条带确定是目的蛋白吗?第二次跑会不会有蛋白保存不当的原因会造成蛋白降解。
成功,就是成为你想成为的人
4楼2013-07-26 16:06:37
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