应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 质粒转化后鉴定的问题
41/1返回列表
查看: 97  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【悬赏金币】回答本帖问题，作者aust将赠送您 7 个金币

aust

金虫 (正式写手)

一只老虫

[求助] 质粒转化后鉴定的问题

我前几天扩增了一个目的基因，把它连接到克隆载体后，转化DH5α，铺板（LB+AMP）。挑取单克隆后摇菌，取2μl为模板进行PCR鉴定，结果为阳性，条带大小完全符合预期目标，然后送测序，并同时－70C保种。测序结果提示是空载，不含目的基因。我把保种菌液复苏后重新划线接种，单克隆一样长的很好，再次挑取后摇菌并PCR鉴定，结果却成阴性了。而且更奇怪的是我同时还把以前保种的菌液也复苏做了PCR鉴定，却也成阴性了。请问哪位高手能帮我解释一下，为何保种前能P出来，保种后复苏就P不出来了？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2007-11-02 09:46:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风而过

银虫 (小有名气)
★ ★
aust(金币+2,VIP+0):谢谢！
1.确定你的过程条件有没有改变.
2.多筛点阳性菌落看能不能找到
3.从结果看很有可能是在做PCR鉴定时受到污染结果出现“假阳性”如果可以，我建议重头做，每一步都要做验证就知道问题出在那了
不知道你做PCR的时候有没有做阳性对照？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2007-11-05 15:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aust

金虫 (正式写手)

一只老虫
我后来挑了30个单克隆菌落作的菌落PCR，但全为阴性。所有的反应体系及反应条件均未变。现在开始从头做了，谢谢！不知道有没有虫虫们也遇到过类似的情况？
赞一下 回复此楼
3楼2007-11-09 16:49:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hn_zht

铁虫 (著名写手)
★
aust(金币+1,VIP+0):谢谢你的回复
很遗憾的告诉你:
1.你的AMP浓度是否是100μlAMP 加入100ml的LB中?及AMP的浓度是否合适
2.你验证的时候挑选的刚好是阳性克隆,其他是阴性的但菌已经有AMP抗性
3.是否是你的蒸馏水污染了目的基因?缓冲夜呢
赞一下(2人) 回复此楼
欢迎加入糖生物技术群：177364074
4楼2007-11-09 20:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aust 的主题更新
41/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +5 ￣^￣゜汗 2026-03-19 7/350 2026-03-22 19:44 by 公瑾逍遥
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭