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质粒转化后鉴定的问题
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| 我前几天扩增了一个目的基因，把它连接到克隆载体后，转化DH5α，铺板（LB+AMP）。挑取单克隆后摇菌，取2μl为模板进行PCR鉴定，结果为阳性，条带大小完全符合预期目标，然后送测序，并同时－70C保种。测序结果提示是空载，不含目的基因。我把保种菌液复苏后重新划线接种，单克隆一样长的很好，再次挑取后摇菌并PCR鉴定，结果却成阴性了。而且更奇怪的是我同时还把以前保种的菌液也复苏做了PCR鉴定，却也成阴性了。请问哪位高手能帮我解释一下，为何保种前能P出来，保种后复苏就P不出来了？ |
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