| 查看: 6377 | 回复: 46 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
PCR扩增DNA序列无条带
|
||
|
最近设计了几对引物分别扩增E. coli和P. aeruginosa的两个基因，但一直没有跑出条带，请高手们指点一下。 想要扩增的目的基因分别为1500 bp和1200 bp，在NCBI找到相应基因后，用MIT的Primer3设计了引物，Tm≈59，GC%在50~55%，引物长20 b。 PCR扩增条件：94°C 4 min；94°C 1 min；54°C 1 min；72°C 1 min；72°C 7 min。跑了27个循环。电泳之后没有条带。 考虑没有条带的原因可能是：模板、Taq酶、反应条件等，又做了下试验。 1、模板是基因组DNA，直接电泳后发现23 kb有明显条带，那应该模板没问题。 2、Taq酶是Takara的，前几天同学刚用过，按理说也没问题，而且我也重新做了实验，分别用Takara和Invitrogen的酶跑PCR，都没与条带。 3、引物可能设计的有问题，我用原来跑出过条带的16s引物做了对照，如果16s跑出来那肯定就是引物问题，但都没有条带就不好说了。但是这个条件16s也跑不出来了... 无法确诊 4、重新调整退火温度到56°C，同样无条带。 求诸位高手帮忙分析下，PCR失败的原因可能会什么啊？万分感谢！！ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
王萌萌1992» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有82人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
41楼2014-05-06 18:01:28
kapa1
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1266.8
- 红花: 2
- 帖子: 140
- 在线: 51.6小时
- 虫号: 582902
- 注册: 2008-07-25
- 性别: MM
- 专业: 生理生态学
2楼2013-07-19 19:52:38
3楼2013-07-19 19:59:40
bullfrog325
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 193 (高中生)
- 金币: 2880.3
- 散金: 200
- 红花: 24
- 帖子: 744
- 在线: 269.5小时
- 虫号: 1864929
- 注册: 2012-06-20
4楼2013-07-19 20:40:00
30