| 查看: 1267 | 回复: 26 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
扩增一个基因
|
||
|
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/BT017850 链接里的这个基因是blast出来的，但是引物设计了多次了，都没有扩出来，不知道是怎么回事，是不是这段序列本身就是错误的呢？ 求高人指点，小弟不胜感激。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有201人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
13楼2013-07-16 09:10:49
2楼2013-07-15 09:55:01
3楼2013-07-15 14:28:58
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-15 20:20:47
1949stone: 回帖置顶 2013-07-16 08:14:11
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-15 20:20:47
1949stone: 回帖置顶 2013-07-16 08:14:11
|
序列不会是错误的，可能您的序列和链接中的序列有些差异，但一般库里公布的序列是没有问题的，因此建议您从模板，引物，PCR反应体系上找原因：1模板的质量，最好扩增之前跑一下模板，对模板的质量包括浓度和纯度有个大概了解。 2引物设计是否合理，包括GC含量，TM值等，一般GC含量在40-60%，TM在55-65度比较好，2个引物的TM值还不能差异太大，另外还要注意设计引物注意避开发夹结构，二聚体，碱基错配等。 3 PCR体系一般不会有问题，模板质量不好多加一些，质量好稀释少加些。 4 退火温度梯度实验。 |
4楼2013-07-15 15:50:52