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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取出现白色不溶物质，求大神指点
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取出现白色不溶物质，求大神指点

在进行完转化后，用菌液进行PCR检测到明显条带，然后提取质粒时就是出现白色不溶于水的物质，据目测猜测为蛋白质，不管多次提取，用手提还是试剂盒提都会出现这种东西。我用的是5α菌，载体是PMD-19。求大神指点！！！！！！！！
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1楼 2013-07-12 20:47:38
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bleach060452

新虫 (小有名气)
哪一步出的白色物质？
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-07-12 22:54:43
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-07-12 22:54:43
哪一步出的白色物质？

就是在用75%乙醇洗时出现的，前几部都还好
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3楼2013-07-13 10:50:56
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

白色物质是含有蛋白的DNA，一般不影响后期的实验。
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4楼2013-07-17 13:26:37
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maidi12

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-07-17 19:51:26
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老伦敦把子肉

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

白色物质应该是蛋白杂质，如果用试剂盒提取肯定最后不会出现，顶多会堵在柱子上，造成质粒浓度低，手提的话可能就会有，用酚氯仿抽提纯化一下
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6楼2013-07-17 20:57:27
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 老伦敦把子肉 at 2013-07-17 20:57:27
白色物质应该是蛋白杂质，如果用试剂盒提取肯定最后不会出现，顶多会堵在柱子上，造成质粒浓度低，手提的话可能就会有，用酚氯仿抽提纯化一下

都试过了，还是有的，
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7楼2013-07-18 09:14:52
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

试剂盒提还有啊？那柱子估计不好吧。另外，找个照片看看，还有步骤发过来看看，出现这种现象，我们的是加溶液3时浑浊，是菌污染了，重新借别人的感受态解决的。不知道你的菌污染没？
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8楼2013-07-18 11:30:14
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wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-18 21:58:19
加第三步中和液的时候振荡要轻柔，建议缓慢颠倒混匀几次就可以了。如果振荡过于剧烈的话蛋白碎片过多，离心的时候不能完全沉淀蛋白，70%乙醇加进去的时候蛋白碎片不能溶解就析出来了。
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9楼2013-07-18 12:57:31
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-07-18 11:30:14
试剂盒提还有啊？那柱子估计不好吧。另外，找个照片看看，还有步骤发过来看看，出现这种现象，我们的是加溶液3时浑浊，是菌污染了，重新借别人的感受态解决的。不知道你的菌污染没？

可能，我去试试换菌
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10楼2013-07-19 10:06:59
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