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十三-小样

铜虫 (小有名气)

[求助] 有人做过AB-APS染色吗?我染不出来不知道是什么原因,大家帮帮忙!

我的具体操作如下,希望大家能帮帮我
一、步骤:
1.        石蜡脱蜡至水,蒸馏水洗
2.        1%阿里新兰醋酸水溶液10-15分钟
3.        蒸馏水洗30秒
4.        高碘酸溶液6分钟
5.        蒸馏水洗2次,每次30秒
6.        Schiff试剂6分钟
7.        0.5%偏重亚硫酸钠 洗2次,每次1-2分钟
8.        流水冲洗5-10分钟
9.        蒸馏水洗2分钟
10.        Harris苏木精染色5分钟
11.        自来水冲洗返蓝
12.        脱水透明封片

二、步骤改进:
1.        石蜡切片脱蜡至水,蒸馏水洗
2.        3%醋酸2分钟
3.        Ph2.5AB染色30-60分钟(60度和常温都做过)(3%醋酸冲洗)
4.        蒸馏水洗2分钟
5.        3%醋酸洗2分钟
6.        蒸馏水洗2分钟
7.        高碘酸7分钟
8.        流水冲洗5分钟
9.        蒸馏水洗2分钟
10.        Schiff试剂5分钟
11.        0.5%偏重亚硫酸钠 洗3次,每次3分钟
12.        流水稍微冲洗(流水冲洗超过3分钟,片子变成红色,完全失去蓝色)
13.        蒸馏水洗
14.        Harris染色5分钟,返蓝
15.        脱水透明

每次都是阿里新兰染不出来,步骤一是刚开始有阿里新兰的染色效果,等到染schiff时,蓝色消失,后改进后,在染harris时蓝色消失,曾经把步骤二里的步骤12去掉,效果一样,最终没有蓝色,只有红色,把所有流水冲洗的去掉(流水偏碱性),效果一样,没有蓝色
其他染色正常。

曾经单独染过阿里新兰,染10张只有1张在准确位置染色,其它都没有在准确位置表达,在该染上色的地方没有染上,猜测是可能阿里新兰的配法有问题或者染色方法有问题,

阿里新兰1g,蒸馏水97ml,冰醋酸3ml,ph2.5和1,但是没染出来,请问是步骤有问题还是试剂配的有问题?
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