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西子泪

新虫 (初入文坛)

[交流] 测序帮帮忙已有12人参与

我对一个基因序列前后进行了5次PCR,PCR产物每次都琼脂糖电泳,发现条带的位置和我的目的基因位置是一致的,但是每次我把PCR产物送测序公司测序,结果都是没有信号,失败。这是怎么回事,怎么会没有信号呢?我问他们的技术员,技术员也说不清楚,请高手分析分析可能的原因是什么呢?
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 回帖置顶 2013-07-10 08:29:33
1949stone: 就是麻烦一点点 不过倒是可行 2013-07-10 08:29:51
实在不行,把PCR产物克隆进T载体再送测序
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-07-10 00:56:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 我们可以要求测序公司给纯化的 隆到载体中 是一个很好的选择 2013-07-10 08:30:33
1949stone: 回帖置顶 2013-07-10 08:30:34
一般测序效果差往往是模板的纯度问题。PCR产物是否经过纯化后再送的测序?由于PCR产物很可能是分子量接近的多个产物的混合体,测序效果不好也是正常的,克隆到载体中后再测序比较保险。
5楼2013-07-10 01:08:25
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普通回帖

wocause

银虫 (小有名气)

同求!
2楼2013-07-09 21:20:44
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bolysu

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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3楼2013-07-09 22:47:16
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refreshing11

新虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 大家看法一致 2013-07-10 08:30:51
克隆测序是个好办法

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2013-07-10 08:15:40
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
隆到载体中 这是大家的一致看法 希望可以帮到你
海纳百川止于至善
7楼2013-07-10 08:31:12
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31569218

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2个意见:1、每次胶回收之后检测一下,是否成功;2、回收产物做克隆:连接、转化,然后挑阳性克隆,然后检测,然后测序
爱之深痛之切
8楼2013-07-10 09:20:55
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longrna

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR产物大小?是否特异?
送的是你自己纯化的还是只是PCR产物未纯化?
你送的测序引物有没有问题?或者送下游测试试。
伟大航线....
9楼2013-07-10 09:30:31
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zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)

T克隆
踏踏实实做好自己,其他的事与你无关。
10楼2013-07-10 10:30:40
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