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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 测序帮帮忙
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西子泪

新虫 (初入文坛)

[交流] 测序帮帮忙 已有12人参与

我对一个基因序列前后进行了5次PCR，PCR产物每次都琼脂糖电泳，发现条带的位置和我的目的基因位置是一致的，但是每次我把PCR产物送测序公司测序，结果都是没有信号，失败。这是怎么回事，怎么会没有信号呢？我问他们的技术员，技术员也说不清楚，请高手分析分析可能的原因是什么呢？
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1楼 2013-07-09 21:13:28
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 回帖置顶 2013-07-10 08:29:33
1949stone: 就是麻烦一点点 不过倒是可行 2013-07-10 08:29:51
实在不行，把PCR产物克隆进T载体再送测序
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-07-10 00:56:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 我们可以要求测序公司给纯化的 隆到载体中 是一个很好的选择 2013-07-10 08:30:33
1949stone: 回帖置顶 2013-07-10 08:30:34
一般测序效果差往往是模板的纯度问题。PCR产物是否经过纯化后再送的测序？由于PCR产物很可能是分子量接近的多个产物的混合体，测序效果不好也是正常的，克隆到载体中后再测序比较保险。
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5楼2013-07-10 01:08:25
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普通回帖

wocause

银虫 (小有名气)
同求！
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2楼2013-07-09 21:20:44
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
3楼2013-07-09 22:47:16
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refreshing11

新虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone: 金币+1, 大家看法一致 2013-07-10 08:30:51
克隆测序是个好办法

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-07-10 08:15:40
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
隆到载体中 这是大家的一致看法 希望可以帮到你
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海纳百川止于至善
7楼2013-07-10 08:31:12
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31569218

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2个意见：1、每次胶回收之后检测一下，是否成功；2、回收产物做克隆：连接、转化，然后挑阳性克隆，然后检测，然后测序
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爱之深痛之切
8楼2013-07-10 09:20:55
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longrna

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR产物大小？是否特异？
送的是你自己纯化的还是只是PCR产物未纯化？
你送的测序引物有没有问题？或者送下游测试试。
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伟大航线....
9楼2013-07-10 09:30:31
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zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)
T克隆
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踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
10楼2013-07-10 10:30:40
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