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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 采用RP-HPLC测定有机酸，但始终无法分开乳酸和抗坏血酸，该怎么办呢？
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静唯尘

新虫 (小有名气)

[求助] 采用RP-HPLC测定有机酸，但始终无法分开乳酸和抗坏血酸，该怎么办呢？

采用RP-HPLC测定泡菜中有机酸，目前在用标准品溶液优化色谱条件，但无论条件怎么变，乳酸和抗坏血酸总是一点都分不开，完全是呈现一个峰的状态，该如何办呢？请各位高手给予指导，多谢！
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1楼 2013-07-06 23:44:15
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)
楼主用的色谱条件是什么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-07-07 09:05:56
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静唯尘

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lifucheng at 2013-07-07 09:05:56
楼主用的色谱条件是什么？

3%甲醇：0.05mol/L磷酸二氢钾（pH2.5），0.8mL/min，25℃，210nm。已经试着调节流动相浓度，pH，以及甲醇添加量，流速和柱温，但它们始终都分不开。急死人了。
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3楼2013-07-07 11:28:39
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xx小小xx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
静唯尘: 金币+3 2013-07-07 14:54:26
不知道你用什么色谱柱，这类亲水性很强的有机酸，调整流动相的余地比较小，应该在色谱柱上改善
C18可能不太容易，用氰基柱应该会有改善，用离子交换色谱会比较适合
如果只有C18柱，可以试一下离子对色谱
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4楼2013-07-07 13:17:53
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用离子交换柱吧，普通的碳十八柱很难分开。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-07-07 14:49:08
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静唯尘

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xx小小xx at 2013-07-07 13:17:53
不知道你用什么色谱柱，这类亲水性很强的有机酸，调整流动相的余地比较小，应该在色谱柱上改善
C18可能不太容易，用氰基柱应该会有改善，用离子交换色谱会比较适合
如果只有C18柱，可以试一下离子对色谱

实验室只有两根色谱柱，一根亲水性的C18，还有一根Kromasil C18,两根都试过，都分不开。又没有离子色谱，纠结。我看文献中有用C18做的，倒是分得开啊，不知道哪里出了问题。
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6楼2013-07-07 14:54:08
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alex

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的是15cm的C18吧？25cm的C18可能能勉强分开。这类物质的分析还是用离子色谱或者离子交换柱比较合适
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没有过不去的坎
7楼2013-07-07 15:36:24
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xx小小xx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 静唯尘 at 2013-07-07 14:54:08
实验室只有两根色谱柱，一根亲水性的C18，还有一根Kromasil C18,两根都试过，都分不开。又没有离子色谱，纠结。我看文献中有用C18做的，倒是分得开啊，不知道哪里出了问题。...

C18的种类也有很多，有些专门针对亲水性物质进行过优化，所以保留能力和选择性会比一般的C18要好一些

可以试一下C18柱做离子对分离模式，用季胺碱作为离子对试剂，加磷酸调整pH，不过详细条件的要摸索一下
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8楼2013-07-08 21:07:39
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cl88887

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有机酸柱Aminex HPX-87H分离有机酸效果很好，而且你分的这两个差这么多，但是没有柱子的话，可以试试用乙腈，乙腈的极性较甲醇小，可以试试，实在不行可以梯度洗脱，配个那个PBS，再配个3%甲醇的PBS，两个溶液进行梯度洗脱
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9楼2013-10-17 16:56:46
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hexued6933

版主 (著名写手)

日出东方，岂能不败

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

尝试下亲水柱运行100％水相吧。流动相，0.1％磷酸和乙腈。我们用welch的aq柱分离了很多有机酸

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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大家好，才是真的好
10楼2013-10-19 12:32:56
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