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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 前成骨细胞2T3和后成骨细胞MLO-A5的诱导矿化为什么我老做不出来呢，求高人指点！
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fentaohao123

金虫 (小有名气)

[求助] 前成骨细胞2T3和后成骨细胞MLO-A5的诱导矿化为什么我老做不出来呢，求高人指点！

我现在在做前成骨细胞2T3和后成骨细胞MLO-A5的诱导矿化实验，用的是文献中的的方法，可就是做不出来，不知道什么原因！求高人指点，先谢谢了！
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努力，奋斗！
1楼 2013-07-04 22:17:29
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Super_M

木虫 (小有名气)
请给出方法，这样说没人能帮你。
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2楼2013-07-05 11:43:12
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Super_M at 2013-07-05 11:43:12
请给出方法，这样说没人能帮你。

2T3:培养基用的是α-MEM+10%FBS+1%的L-谷氨酰胺+1%的双抗，当细胞接种后彼此接触后（90%以上），开始诱导，及补加ascorbic acid（浓度为100μg/mL）和β-甘油磷酸钠（浓度为5mM ），每两天换一次液，并分别在第7,14,21天茜素红s染色。可就是没有，要么染出来的就不是红色的，而是黑色片层状的！
A5的和上面的方法差不多，就是培养基中的血清变为5%FBS+5%BCS，染色时间变为第3,6,9天染色，而且然不出来。其他的都一样。
求指教。
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努力，奋斗！
3楼2013-07-05 16:27:30
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妙语1989

金虫 (小有名气)
★ ★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-17 21:49:23
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-18 00:51:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by fentaohao123 at 2013-07-05 16:27:30
2T3:培养基用的是α-MEM+10%FBS+1%的L-谷氨酰胺+1%的双抗，当细胞接种后彼此接触后（90%以上），开始诱导，及补加ascorbic acid（浓度为100μg/mL）和β-甘油磷酸钠（浓度为5mM ），每两天换一次液，并分别在第7,1 ...

可以试试改变茜素红的pH，这个很重要
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4楼2013-07-16 21:03:59
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leechau2007

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-17 21:48:53
不是所有的β-甘油磷酸钠都可以诱导矿化的，建议使用sigma的，另外最好用G9422，这个是细胞培养专用的
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5楼2013-07-17 10:59:54
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妙语1989

金虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-17 21:49:15
引用回帖:
5楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-17 10:59:54
不是所有的β-甘油磷酸钠都可以诱导矿化的，建议使用sigma的，另外最好用G9422，这个是细胞培养专用的

你们也做成骨诱导吗？不知道诱导的细胞会不会出现卷边的情况？我们的细胞在24孔板中都卷边了，破损严重，不知道有没有什么解决方案
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6楼2013-07-17 16:03:24
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leechau2007

木虫 (初入文坛)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-17 21:49:01
引用回帖:
6楼: Originally posted by 妙语1989 at 2013-07-17 16:03:24
你们也做成骨诱导吗？不知道诱导的细胞会不会出现卷边的情况？我们的细胞在24孔板中都卷边了，破损严重，不知道有没有什么解决方案...

我也做成骨诱导，我做的是血管平滑肌的成骨分化诱导，细胞出现卷的情况主要是增殖过度，可以考虑一下降低铺板的细胞密度，另外也可以降低培养基中血清的用量，减慢细胞的生长。我们以前买的β-甘油磷酸钠是sigma的细胞培养专用的，后来那个货号停产了就又随便买了一瓶sigma的，但是不是专门用来培养细胞的，钙化效果一般，测钙含量只有原来的三分之一左右。后来换了G9422，效果很好。
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7楼2013-07-17 19:25:21
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leechau2007

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-17 21:49:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by fentaohao123 at 2013-07-05 16:27:30
2T3:培养基用的是α-MEM+10%FBS+1%的L-谷氨酰胺+1%的双抗，当细胞接种后彼此接触后（90%以上），开始诱导，及补加ascorbic acid（浓度为100μg/mL）和β-甘油磷酸钠（浓度为5mM ），每两天换一次液，并分别在第7,1 ...

你诱导的时候，细胞已经太密了，我们诱导都是40%左右就开始了，一般传代两天以后只要贴壁的细胞数量还可以就诱导。
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8楼2013-07-17 19:30:41
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妙语1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-17 19:25:21
我也做成骨诱导，我做的是血管平滑肌的成骨分化诱导，细胞出现卷的情况主要是增殖过度，可以考虑一下降低铺板的细胞密度，另外也可以降低培养基中血清的用量，减慢细胞的生长。我们以前买的β-甘油磷酸钠是sigma的 ...

谢谢，回头试试。
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9楼2013-07-18 10:58:08
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-17 10:59:54
不是所有的β-甘油磷酸钠都可以诱导矿化的，建议使用sigma的，另外最好用G9422，这个是细胞培养专用的

嗯，我用的就是sigma的。
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努力，奋斗！
10楼2013-07-20 14:25:39
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