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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 前成骨细胞2T3和后成骨细胞MLO-A5的诱导矿化为什么我老做不出来呢，求高人指点！
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fentaohao123

金虫 (小有名气)

[求助] 前成骨细胞2T3和后成骨细胞MLO-A5的诱导矿化为什么我老做不出来呢，求高人指点！

我现在在做前成骨细胞2T3和后成骨细胞MLO-A5的诱导矿化实验，用的是文献中的的方法，可就是做不出来，不知道什么原因！求高人指点，先谢谢了！
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1楼 2013-07-04 22:17:29
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Super_M at 2013-07-05 11:43:12
请给出方法，这样说没人能帮你。

2T3:培养基用的是α-MEM+10%FBS+1%的L-谷氨酰胺+1%的双抗，当细胞接种后彼此接触后（90%以上），开始诱导，及补加ascorbic acid（浓度为100μg/mL）和β-甘油磷酸钠（浓度为5mM ），每两天换一次液，并分别在第7,14,21天茜素红s染色。可就是没有，要么染出来的就不是红色的，而是黑色片层状的！
A5的和上面的方法差不多，就是培养基中的血清变为5%FBS+5%BCS，染色时间变为第3,6,9天染色，而且然不出来。其他的都一样。
求指教。
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3楼2013-07-05 16:27:30
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-17 10:59:54
不是所有的β-甘油磷酸钠都可以诱导矿化的，建议使用sigma的，另外最好用G9422，这个是细胞培养专用的

嗯，我用的就是sigma的。
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10楼2013-07-20 14:25:39
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 妙语1989 at 2013-07-17 16:03:24
你们也做成骨诱导吗？不知道诱导的细胞会不会出现卷边的情况？我们的细胞在24孔板中都卷边了，破损严重，不知道有没有什么解决方案...

嗯，是的，一般在孔比较小的器皿中就比较容易卷边，你可以使用12孔板，我一般在12孔板做，效果还行，就是注意在每次换液的时候小心一些。
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11楼2013-07-20 14:27:51
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-17 19:30:41
你诱导的时候，细胞已经太密了，我们诱导都是40%左右就开始了，一般传代两天以后只要贴壁的细胞数量还可以就诱导。...

不是文献中不都是细胞接触了才开始诱导么？
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12楼2013-07-20 14:30:48
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
★
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖 2013-07-20 17:58:10
引用回帖:
4楼: Originally posted by 妙语1989 at 2013-07-16 21:03:59
可以试试改变茜素红的pH，这个很重要...

那你能不能说个pH范围呢？我用的是pH在4.2左右的。
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13楼2013-07-20 15:32:14
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-20 20:06:37
我们实验室一直这么做的，老板也让我们这样做，我们这么早诱导有时候密度大了也会卷。...

那你说的是那种细胞？我们这里一般不会卷的，只要你操作仔细认真就行。
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15楼2013-07-20 23:31:07
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 妙语1989 at 2013-07-22 12:05:47
我们用的细胞是ST2细胞。文献里用这个的也蛮少，所以不知道与细胞有没有关系...

嗯，差不多，我们用的是MC3T3-E1，MLO-A5和2T3细胞。这三张细胞的贴壁程度都有所不同。
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19楼2013-07-24 22:32:24
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 妙语1989 at 2013-07-22 12:04:11
文献上报道的一般有4.0－4.2，还有一种是8.3吧。我们现在用的是4.2...

嗯，那你用的是那种细胞呢？
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20楼2013-07-24 22:33:06
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fentaohao123

金虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-21 19:49:20
我做的是血管平滑肌细胞，我们研究动脉粥样硬化，诱导它成骨分化。我们的细胞最起码要养23天以上，一般控制好接板的密度就不会卷。...

哦，明白，谢谢了。
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21楼2013-07-24 22:33:59
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