24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2280  |  回复: 11

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

我注意到了你的反馈,现想详细了解一下你的实验设计
1. 你的目的载体是什么?用的哪两个酶进行双酶切的,以及酶来自哪个公司?
你是如何确定目的载体双酶切确定可以切开的?

2. 含有同样酶切位点的目的片段先连到PMD19-T上,你是指pMD19-T而不是pMD19-T simple(这一点很重要)?

3. 却又连不到目的载体上?
你是指什么呢?是转化后没有菌落长出,还是长出的菌落都是载体自连?

做分子克隆,连不上载体的原因很多,希望你能说出详细的实验过程,好让虫友们针对你的具体的实验进行查找问题,否则简单的一个究竟是什么原因呢,真的很难说清楚原因。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
11楼2013-07-06 19:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by 凉皮 at 2013-07-05 11:33:41
我把目标载体酶切1小时后,用未酶切的目标载体做对照,跑琼脂糖电泳胶,结果切后的产物是3条带,这不就证明是切开了。转化后都是目标载体自连的,没有连入目的基因的滞后的条带。但是该目的基因是可以连到PMD-19T载 ...

“我把目标载体酶切1小时后,用未酶切的目标载体做对照,跑琼脂糖电泳胶,结果切后的产物是3条带,这不就证明是切开了。”

不明白这里为什么切后的产物是3条带,你用的双酶切中有一个酶在载体上不是单酶切位点?

能否告知,你用的是什么目标载体,以及用的什么限制酶?

感谢你积极向版主反馈问题!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
12楼2013-07-06 19:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凉皮 的主题更新
信息提示
请填处理意见