应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆基因为什么一直连不到载体上
52/1返回列表
查看: 2934  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

凉皮

铜虫 (初入文坛)

[求助] 克隆基因为什么一直连不到载体上

目的载体双酶切确定可以切开，含有同样酶切位点的目的片段先连到PMD19-T上的，之后把目的片段从PMD-19-T载体上切下来之后，却又连不到目的载体上了，究竟是什么原因呢?
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-07-04 21:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凉皮 at 2013-07-05 11:33:41
我把目标载体酶切1小时后，用未酶切的目标载体做对照，跑琼脂糖电泳胶，结果切后的产物是3条带，这不就证明是切开了。转化后都是目标载体自连的，没有连入目的基因的滞后的条带。但是该目的基因是可以连到PMD-19T载 ...

“我把目标载体酶切1小时后，用未酶切的目标载体做对照，跑琼脂糖电泳胶，结果切后的产物是3条带，这不就证明是切开了。”

不明白这里为什么切后的产物是3条带，你用的双酶切中有一个酶在载体上不是单酶切位点？

能否告知，你用的是什么目标载体，以及用的什么限制酶？

感谢你积极向版主反馈问题！
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
12楼2013-07-06 19:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-04 22:18:52
1，载体和插入片段要有一定mol比。。否则很难连上去。，建议胶回收后分别测浓度，然后计算，载体0.03pmol。插入片段0.3pmol。。这样会很容易连
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-04 21:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-05 15:03:50
gyesang: 编辑内容 2013-07-06 19:06
能不能说的再详细一些，转化后没有菌落还是都是false positive？
你怎么确定你的目标载体是否是切好的呢？这个可能是关键

[ Last edited by gyesang on 2013-7-6 at 19:06 ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-05 08:22:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 21:58:15
1，载体和插入片段要有一定mol比。。否则很难连上去。，建议胶回收后分别测浓度，然后计算，载体0.03pmol。插入片段0.3pmol。。这样会很容易连

摩尔比确实很重要.这个建议你可以去试.
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-05 10:11:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭