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花雨sky

金虫 (小有名气)

[求助] 求助交流——提取茶叶DNA

初次做分子实验提取茶叶DNA,右边是随便找的一个marker,想问问各位大侠
1.电泳尾部一片亮是DNA降解吗,或者是RNA吗?
2. 我用的是改良的CTAB法提取的,冰上研磨,没有用液氮,这对DNA的降解产生的影响大吗?
3. 如果用SSR标记,跑PCR的时候,对跑出来的带影响大吗?
PS:茶叶中的多酚类物质含量较高
请各位大侠指导,感激不尽求助交流——提取茶叶DNA
[muchong.com][2134107]Image1.jpg

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-4 at 10:42 ]
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  • 2013-07-04 10:24:15, 438.28 K

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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-04 11:39:50
花雨sky: 金币+10, 有帮助 2013-07-05 10:01:04
明显降解。,且rna较多,可以改进:1,加入rna酶,,减少rna2,加巯基乙醇3,抽滤的步骤小心吸取上清。4,异丙醇加入轻柔搅起dna
2楼2013-07-04 10:53:54
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花雨sky

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 10:53:54
明显降解。,且rna较多,可以改进:1,加入rna酶,,减少rna2,加巯基乙醇3,抽滤的步骤小心吸取上清。4,异丙醇加入轻柔搅起dna

我想问下,从图中怎么看出来是DNA降解,RNA较多呢?我是用冰无水乙醇沉淀的,加入后并不能直接看到DNA沉淀(我做的成品茶和鲜叶中,只有茶树鲜叶加入乙醇后直接看到DNA)
3楼2013-07-04 21:41:51
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
花雨sky: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-05 11:56:48
引用回帖:
3楼: Originally posted by 花雨sky at 2013-07-04 21:41:51
我想问下,从图中怎么看出来是DNA降解,RNA较多呢?我是用冰无水乙醇沉淀的,加入后并不能直接看到DNA沉淀(我做的成品茶和鲜叶中,只有茶树鲜叶加入乙醇后直接看到DNA)...

降解不是很严重,有涂抹条带,在2000一下的条带很亮,但是涂抹,,是rna降解的表现。。加rna酶处理会很好。。。可以用75%的乙醇的洗涤,洗两遍。。。
4楼2013-07-05 11:40:50
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花雨sky

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-05 11:40:50
降解不是很严重,有涂抹条带,在2000一下的条带很亮,但是涂抹,,是rna降解的表现。。加rna酶处理会很好。。。可以用75%的乙醇的洗涤,洗两遍。。。...

嗯,十分感谢
5楼2013-07-05 11:56:41
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