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Eva_yanglh

金虫 (小有名气)

[交流] 抗氧化活性成分的分离纯化 已有5人参与

目前在做植化,粗提物萃取后欲把水部进一步分析,由于含水量大不能上硅胶于是我用了大孔树脂,然后得到50%乙醇洗脱部位含有较多我想要的物质,经过UV确定波长后再用HPLC扫描发现只有四个峰,物质可不可以判断相对较纯了呢?可是截取某峰进行打谱还是不OK··不知道下一步该怎么再纯化了。50%乙醇部能上硅胶不?可是看资料硅胶还是属于粗分的分离手段呢···用凝胶么?希望有经验的大侠们能指导交流下.
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做这个分离纯化,想死的心都有了···
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)

kerry

优秀版主

★ ★
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xiaoxiao270: 金币+1 2013-07-06 19:09:18
先把样品旋干,之后就可以上硅胶柱了,液相制备最好了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Domyallbesttohaveahappylife.
2楼2013-07-03 13:32:15
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分离高手

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
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xiaoxiao270: 金币+2 2013-07-06 19:09:22
你这个好弄
方案一:直接把接出来的50%乙醇收集液,加上一倍的水稀释到25%直接上样,上反向层析树脂SKP-10-4300,然后25%乙醇   35%乙醇   45%乙醇  55%乙醇梯度洗脱 ,分段收集你要的每一个物质就行了。然后浓缩旋干掉就OK。
方法二:自己装个ODS柱,粒径最好小点的,40um左右的,浓缩干了,少量溶液上样,梯度洗脱收集。
方案三:有制备液相的话,直接上制备液相。
至于硅胶  凝胶 就基本拉到了。极性太大,又是同一部位
3楼2013-07-04 12:50:59
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Eva_yanglh

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangkaibo123 at 2013-07-03 13:32:15
先把样品旋干,之后就可以上硅胶柱了,液相制备最好了

旋干之后用什么溶剂溶解呢?我们这台旋转蒸发仪老旋不干,好苦恼···
做这个分离纯化,想死的心都有了···
4楼2013-07-04 15:01:53
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Eva_yanglh

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 分离高手 at 2013-07-04 12:50:59
你这个好弄
方案一:直接把接出来的50%乙醇收集液,加上一倍的水稀释到25%直接上样,上反向层析树脂SKP-10-4300,然后25%乙醇   35%乙醇   45%乙醇  55%乙醇梯度洗脱 ,分段收集你要的每一个物质就行了。然后浓缩旋 ...

SKP-10-4300这树脂好像挺少人用的吧,我搜索了下没有相关的中文或英文文献参考呢,你有不?可以发给我吗?eva_yanglh@126.com  关于ODS填料,目前了解也是比较少的,刚查了下,除了粒径的区别,还有其他类别吧,比如说什么大曹DAISOGEL ODS-BP亲水反相硅胶填料,大虾有木有资料参考下?针对我这极性大的未知物质。为什么说极性大就不能用硅胶凝胶呢?硅胶有人说极性大小都可以分,只是不能上含水量高的;凝胶就是分子量大小的筛选···至于制备液相,唉,实验室只有一台分析液相,带SPD的,还木有DAD。老板想我用分析液相制备呢···工作量该有多大啊···
做这个分离纯化,想死的心都有了···
5楼2013-07-04 15:15:17
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)

kerry

优秀版主

★ ★
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xiaoxiao270: 金币+1 2013-07-06 19:09:27
引用回帖:
4楼: Originally posted by Eva_yanglh at 2013-07-04 15:01:53
旋干之后用什么溶剂溶解呢?我们这台旋转蒸发仪老旋不干,好苦恼···...

旋到小体积在水浴锅上挥干,之后用甲醇和二氯溶解上硅胶 一定不能有水
Domyallbesttohaveahappylife.
6楼2013-07-04 16:27:37
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Eva_yanglh

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wangkaibo123 at 2013-07-04 16:27:37
旋到小体积在水浴锅上挥干,之后用甲醇和二氯溶解上硅胶 一定不能有水...

好的,谢谢!
做这个分离纯化,想死的心都有了···
7楼2013-07-04 16:32:12
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Decis

银虫 (小有名气)

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xiaoxiao270: 金币+1 2013-07-06 19:09:32
用分析液相来制备,太难搞了。
50%乙醇洗脱的极性比较大,可考虑先用硅胶粗分,然后再反相柱层析。
样品旋不干,可能你的真空泵不行。可以倒在一个表面皿里,放在水浴锅上用风扇吹,现在气温高,干得很快的,这个,一般人我不告诉他。
小木虫,威力无穷
8楼2013-07-04 16:45:33
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Decis

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
顺便请问:抗氧化,怎么测定啊?
小木虫,威力无穷
9楼2013-07-04 16:48:06
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Eva_yanglh

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Decis at 2013-07-04 16:45:33
用分析液相来制备,太难搞了。
50%乙醇洗脱的极性比较大,可考虑先用硅胶粗分,然后再反相柱层析。
样品旋不干,可能你的真空泵不行。可以倒在一个表面皿里,放在水浴锅上用风扇吹,现在气温高,干得很快的,这个 ...

是呀,我也觉得好无奈啊,5-10ul的进样量,浓度大了还给我出平头峰,烦死了!我的提取物已经用大孔树脂粗分过了,是否还有必要用硅胶粗分?这两种层析原理貌似差不多的呢···嗯,旋不干,我们也考虑过是不是真空泵的问题。话说,Decis你好幽默哦,加个好友呗
做这个分离纯化,想死的心都有了···
10楼2013-07-04 18:03:45
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