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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 芒果蔗糖转化酶的纯化遇到了问题 求高人指点
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小李爱学习: 金币+5, ★有帮助 2013-07-06 23:13:30
首先你要明确，一个酶的分离纯化几乎没有一个成形的套路模式。需要多加摸索。
你给出的图并不能完全说明问题。对于每一个纯化步骤，你最好给出蛋白洗脱图和酶活趋势图，那样才能够根据酶活和蛋白的分布判断纯化效果。此外，对于每一个柱子之后，要收集所有有活性的级分跑胶，在胶上根据各蛋白条带的分布，也能大体猜测你的蛋白是哪一条。
Sephacryl 300的流速稍微快了一点，但这不应该是主要的因素。同理，缓冲液和pH在分子筛层析中也不应该是主要的影响分离的因素。一般我会用Sepharose CL-6B去做蛋白质的纯化，效果还不错。此外，你的这个柱子的直径太小，注定上样体积就很小，是否适合制备？可能只适合用来分析。
所谓“用目的蛋白质送到生物技术公司制备出单克隆抗体（约3个月时间)，然后亲和层析，制备单抗时你先做别的实验”，我觉得不现实。你倒不如跑native PAGE胶，寻找一种可靠的胶上活性染色技术，这样可以快速在胶上定位你的目的蛋白。
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11楼2013-07-05 12:06:24
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6088574

有人专门开贴子回答你啊！！！
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海纳百川止于至善
12楼2013-07-05 12:09:31
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小李爱学习
引用回帖:
11楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-07-05 12:06:24
首先你要明确，一个酶的分离纯化几乎没有一个成形的套路模式。需要多加摸索。
你给出的图并不能完全说明问题。对于每一个纯化步骤，你最好给出蛋白洗脱图和酶活趋势图，那样才能够根据酶活和蛋白的分布判断纯化效果 ...

13楼2013-07-06 23:13:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
既然楼主已经自己解决问题了，那么请联系版主退还你悬赏的金币。
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14楼2013-07-07 02:26:50
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yanlinchun

铜虫 (小有名气)
内容已删除
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15楼2013-07-08 15:22:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

蛋白质纯化——非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后回收蛋白质的简单方法
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4054503

半年前我拿到EPI的那些蛋白质纯化的帖子我找不到了，因为点击EPI记录的时候论坛不把它们显示出来，剩下我发的一张主题帖倒是无论过多久都还显示出来，就贴上来算了，因为我的直觉是依照现在的情况，割胶可能是有必要的，至于原因，分析起来打字要花大半小时，很麻烦。

一方面是近段时间忙得焦头烂额，另一方面是不想重复拿EPI，但是看这个楼主如果想纯化好，找找资料是很有必要的，不要一急就乱了阵脚，反而更不好解决问题。不过不知道3个月过去了，大概这个酶已经达到电泳纯了吧？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
16楼2013-10-02 01:44:31
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