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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助能使活细胞内碱性磷酸酶升高或降低的诱导剂或抑制剂
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wnj007881

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-29 19:36:34
我们可以换个角度设计实验：改变注入细胞中的荧光分子的数量与浓度，这样来测定不同数量的比例的荧光分子与细胞内的目的酶分子之间的结合状况。

可以用同步化的同种类的细胞，然后分数量与浓度梯度注入同种的的荧 ...

非常感谢您的帮助！可能我的表述有些问题，我的荧光分子是作为酶的底物，在碱性磷酸酶的作用下分子结构发生变化，从而产生荧光增强。因此在我的实验里只要使碱性磷酸水解酶失活，就可以达到实验目的。

考虑到您上述的建议，我想是否可以找两种不同的细胞种类，他们细胞内的碱性磷酸酶含量差异很大。加入我的荧光分子后，做一组以时间为变量的荧光照片。碱性磷酸酶含量少的细胞荧光随时间基本没有变化，而碱性磷酸酶含量多的细胞荧光随时间变化逐渐增强。这样是否可以说明问题？
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11楼2013-06-30 10:19:22
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-06-30 19:01:25
wnj007881: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-06-30 21:36:17
引用：“考虑到您上述的建议，我想是否可以找两种不同的细胞种类，他们细胞内的碱性磷酸酶含量差异很大。加入我的荧光分子后，做一组以时间为变量的荧光照片。碱性磷酸酶含量少的细胞荧光随时间基本没有变化，而碱性磷酸酶含量多的细胞荧光随时间变化逐渐增强。这样是否可以说明问题？”
回答：我原来没有明白你的意思，现在听明白了，我周一去图书馆查一下几本酶抑制剂英文手册（因为现在我借的书已经达到了图书馆的最高限额，不能再借了）。
我认为还是对于不同细胞周期的同种细胞（最好能够找到不同细胞周期的碱性磷酸酶的变化量比较大的细胞，但是找不到也该作此实验）加入不同浓度的荧光小分子测试碱性磷酸酶是首要的，荧光小分子可分梯度加入。不同细胞的也可以做，但是细胞内部环境复杂，不是简单的酶浓度或者数量的因素所能决定荧光小分子参加酶促反应；只做不同细胞的即使酶的浓度差异很大，细胞内的其他分子，酶的折叠形态，分子拥挤效应，细胞质基质离子强度和pH值等因素太多，即使同一种细胞在不同细胞周期其变化也很多。
所以我个人认为先做同一种细胞在不同细胞周期其变化的碱性磷酸酶的情况应该好一些，之后在考虑不同细胞，每种情况都应该同时破碎细胞，用细胞的提取液实验，再有破碎统一状态下的细胞后提取出碱性磷酸酶与荧光底物实验，若有可能后两种情况，可以改变一些实验条件比较其与细胞内实验的数据，应该能够有所收获。
Good Luck！
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12楼2013-06-30 12:28:01
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

请见："碱性磷酸酶抑制剂文献（应助回答）"一贴（搜一下本版），不知为什么今天的网址是乱码。
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13楼2013-06-30 14:54:49
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
我在那贴贴了五篇文章，也可用“Inhibition of alkaline phosphatase”，很容易查出来文献。

下次我概不受理查文献，这次破例！
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14楼2013-06-30 15:00:05
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wnj007881

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-30 12:28:01
引用：“考虑到您上述的建议，我想是否可以找两种不同的细胞种类，他们细胞内的碱性磷酸酶含量差异很大。加入我的荧光分子后，做一组以时间为变量的荧光照片。碱性磷酸酶含量少的细胞荧光随时间基本没有变化，而碱性 ...

我大致看了一下您给我的文献，这些文献一般都是在模拟生物环境做的实验，像苯丙氨酸和Levamisole作为抑制剂都是在缓冲溶液中做的，碱性磷酸酶也是事先提取。是不是因为文献是早期的原因还是在细胞内本身就很难实现？期待您明天去图书馆查阅的结果，非常感谢！
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15楼2013-06-30 21:43:35
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
我不再查了，图书馆的酶抑制剂手册还不及论文叙述的多！我说过不再受理查阅文献之事！就不在查阅了！此贴到此为止！
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16楼2013-06-30 22:53:46
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匿名

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17楼2014-07-17 15:12:27
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