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wnj007881

铁杆木虫 (正式写手)

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[求助] 求助能使活细胞内碱性磷酸酶升高或降低的诱导剂或抑制剂

我现在做的一个荧光分子能与碱性磷酸酶结合，现在想人为调节活细胞内碱性磷酸酶含量的多少来测试荧光分子的响应，求助大家有什么诱导剂或抑制剂能改变细胞内碱性磷酸酶含量的。

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1楼 2013-06-27 10:13:23

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凌波丽

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-06-30 19:01:25
wnj007881: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-06-30 21:36:17

引用：“考虑到您上述的建议，我想是否可以找两种不同的细胞种类，他们细胞内的碱性磷酸酶含量差异很大。加入我的荧光分子后，做一组以时间为变量的荧光照片。碱性磷酸酶含量少的细胞荧光随时间基本没有变化，而碱性磷酸酶含量多的细胞荧光随时间变化逐渐增强。这样是否可以说明问题？”
回答：我原来没有明白你的意思，现在听明白了，我周一去图书馆查一下几本酶抑制剂英文手册（因为现在我借的书已经达到了图书馆的最高限额，不能再借了）。
我认为还是对于不同细胞周期的同种细胞（最好能够找到不同细胞周期的碱性磷酸酶的变化量比较大的细胞，但是找不到也该作此实验）加入不同浓度的荧光小分子测试碱性磷酸酶是首要的，荧光小分子可分梯度加入。不同细胞的也可以做，但是细胞内部环境复杂，不是简单的酶浓度或者数量的因素所能决定荧光小分子参加酶促反应；只做不同细胞的即使酶的浓度差异很大，细胞内的其他分子，酶的折叠形态，分子拥挤效应，细胞质基质离子强度和pH值等因素太多，即使同一种细胞在不同细胞周期其变化也很多。
所以我个人认为先做同一种细胞在不同细胞周期其变化的碱性磷酸酶的情况应该好一些，之后在考虑不同细胞，每种情况都应该同时破碎细胞，用细胞的提取液实验，再有破碎统一状态下的细胞后提取出碱性磷酸酶与荧光底物实验，若有可能后两种情况，可以改变一些实验条件比较其与细胞内实验的数据，应该能够有所收获。
Good Luck！