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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)

[求助] HPLC 标准曲线总是出问题...急死了..

现在刚开始做实验,但是做了1个月的标准曲线,陆续发现目前做的化合物对流动相缓冲溶液的pH特别敏感。同时quality control & standards 不能匹配,

我的实验过程是这样的,首先配两个样品20uM, 15uM ,然后20uM的作为standard 稀释多个,15uM 作为qc也稀释多个, 进样时依照浓度大小,依次进样。

结果每次的结果都是 qc部分偏小,在standards的标准曲线下面,不能匹配。

上周五做的一次更离奇,完全不匹配了...怎么回事啊?我觉得我使用移液枪完全没有问题。
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huangq816

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从你的描述来看,是你配制的溶液线性不好,还是用精密移液管移液,误差可能会小点。
人生就像一场马拉松,跑的最快的未必是笑到最后的!
4楼2013-06-25 10:59:26
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sjzhang156

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的QC不是和标准曲线一份,而且浓度是20和15,这两个配制过程出现误差是可能性很大的,再有进样要从小浓度逐渐增大,进完样之后要有足够的冲洗时间确保上一针的残留不会影响下一针。实在不行你交叉进样,一个标准一个QC,不排除因为仪器或者柱子的污染造成信号漂移。
5楼2013-06-25 16:55:49
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sjzhang156

银虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sjzhang156 at 2013-06-25 16:55:49
你的QC不是和标准曲线一份,而且浓度是20和15,这两个配制过程出现误差是可能性很大的,再有进样要从小浓度逐渐增大,进完样之后要有足够的冲洗时间确保上一针的残留不会影响下一针。实在不行你交叉进样,一个标准一 ...

标准品和QC交叉进样可以最大限度较少仪器漂移的影响
6楼2013-06-25 16:57:04
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
注意你样品的浓度和粘度,生物产品的粘度较大,肯定有很大误差的。
悲催的研发!
8楼2013-06-26 09:21:13
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普通回帖

hxl4054

铁杆木虫 (知名作家)

薛定谔的喵星人

【答案】应助回帖

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移液枪误差还是挺大的吧,个人愚见,没做过药分
2楼2013-06-25 00:22:10
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mikey_m

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
移液枪的误差如何是要看具体操作的
这个上面的问题挺多的
仔细找找原因吧
3楼2013-06-25 08:58:09
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swallow13

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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7楼2013-06-25 17:08:19
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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by huangq816 at 2013-06-25 10:59:26
从你的描述来看,是你配制的溶液线性不好,还是用精密移液管移液,误差可能会小点。

其实我自己一开始担心移液枪的问题,然后我用分析天平测了几组移液枪取液的数据。 的确有偏差,但是不会很大,最大1%的差别
9楼2013-06-27 03:33:36
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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sjzhang156 at 2013-06-25 16:55:49
你的QC不是和标准曲线一份,而且浓度是20和15,这两个配制过程出现误差是可能性很大的,再有进样要从小浓度逐渐增大,进完样之后要有足够的冲洗时间确保上一针的残留不会影响下一针。实在不行你交叉进样,一个标准一 ...

必须是两份啊,不然怎么一个标准,一个QC呢?
现在的确是交叉进样了。问题还是有,我感觉是化合物溶解的不好...
10楼2013-06-27 03:34:51
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