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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 标准曲线总是出问题...急死了..
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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)

[求助] HPLC 标准曲线总是出问题...急死了..

现在刚开始做实验，但是做了1个月的标准曲线，陆续发现目前做的化合物对流动相缓冲溶液的pH特别敏感。同时quality control & standards 不能匹配，

我的实验过程是这样的，首先配两个样品20uM, 15uM ,然后20uM的作为standard 稀释多个，15uM 作为qc也稀释多个， 进样时依照浓度大小，依次进样。

结果每次的结果都是 qc部分偏小，在standards的标准曲线下面，不能匹配。

上周五做的一次更离奇，完全不匹配了...怎么回事啊？我觉得我使用移液枪完全没有问题。
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1楼 2013-06-25 00:13:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

huangq816

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从你的描述来看，是你配制的溶液线性不好，还是用精密移液管移液，误差可能会小点。
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人生就像一场马拉松，跑的最快的未必是笑到最后的！
4楼2013-06-25 10:59:26
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sjzhang156

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的QC不是和标准曲线一份，而且浓度是20和15，这两个配制过程出现误差是可能性很大的，再有进样要从小浓度逐渐增大，进完样之后要有足够的冲洗时间确保上一针的残留不会影响下一针。实在不行你交叉进样，一个标准一个QC，不排除因为仪器或者柱子的污染造成信号漂移。
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5楼2013-06-25 16:55:49
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sjzhang156

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sjzhang156 at 2013-06-25 16:55:49
你的QC不是和标准曲线一份，而且浓度是20和15，这两个配制过程出现误差是可能性很大的，再有进样要从小浓度逐渐增大，进完样之后要有足够的冲洗时间确保上一针的残留不会影响下一针。实在不行你交叉进样，一个标准一 ...

标准品和QC交叉进样可以最大限度较少仪器漂移的影响
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6楼2013-06-25 16:57:04
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
注意你样品的浓度和粘度，生物产品的粘度较大，肯定有很大误差的。
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悲催的研发！
8楼2013-06-26 09:21:13
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普通回帖

hxl4054

铁杆木虫 (知名作家)

薛定谔的喵星人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
移液枪误差还是挺大的吧，个人愚见，没做过药分
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2楼2013-06-25 00:22:10
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mikey_m

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
移液枪的误差如何是要看具体操作的
这个上面的问题挺多的
仔细找找原因吧
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3楼2013-06-25 08:58:09
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swallow13

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
7楼2013-06-25 17:08:19
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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huangq816 at 2013-06-25 10:59:26
从你的描述来看，是你配制的溶液线性不好，还是用精密移液管移液，误差可能会小点。

其实我自己一开始担心移液枪的问题，然后我用分析天平测了几组移液枪取液的数据。 的确有偏差，但是不会很大，最大1%的差别
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9楼2013-06-27 03:33:36
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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sjzhang156 at 2013-06-25 16:55:49
你的QC不是和标准曲线一份，而且浓度是20和15，这两个配制过程出现误差是可能性很大的，再有进样要从小浓度逐渐增大，进完样之后要有足够的冲洗时间确保上一针的残留不会影响下一针。实在不行你交叉进样，一个标准一 ...

必须是两份啊，不然怎么一个标准，一个QC呢？
现在的确是交叉进样了。问题还是有，我感觉是化合物溶解的不好...
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10楼2013-06-27 03:34:51
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