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qiqicharlotte

银虫 (初入文坛)

[求助] HPLC 标准曲线总是出问题...急死了..

现在刚开始做实验,但是做了1个月的标准曲线,陆续发现目前做的化合物对流动相缓冲溶液的pH特别敏感。同时quality control & standards 不能匹配,

我的实验过程是这样的,首先配两个样品20uM, 15uM ,然后20uM的作为standard 稀释多个,15uM 作为qc也稀释多个, 进样时依照浓度大小,依次进样。

结果每次的结果都是 qc部分偏小,在standards的标准曲线下面,不能匹配。

上周五做的一次更离奇,完全不匹配了...怎么回事啊?我觉得我使用移液枪完全没有问题。
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sjzhang156

银虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by qiqicharlotte at 2013-06-27 03:34:51
必须是两份啊,不然怎么一个标准,一个QC呢?
现在的确是交叉进样了。问题还是有,我感觉是化合物溶解的不好......

我的意思你用来做工作曲线的和用来加标的标准溶液最好是一份,说实在话,谁都不敢保证自己每次配的浓度都准确,首先保证你这两份溶液是没有问题的,可以单独进标准品看看是否和你预期比值一样。另外你觉得化合物溶解不好,那就要调整流动相组成和起始比例啊,否则待测物在柱头析出,准确度也下降了。
12楼2013-06-27 08:24:14
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hxl4054

铁杆木虫 (知名作家)

薛定谔的喵星人

【答案】应助回帖

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移液枪误差还是挺大的吧,个人愚见,没做过药分
2楼2013-06-25 00:22:10
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mikey_m

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
移液枪的误差如何是要看具体操作的
这个上面的问题挺多的
仔细找找原因吧
3楼2013-06-25 08:58:09
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huangq816

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从你的描述来看,是你配制的溶液线性不好,还是用精密移液管移液,误差可能会小点。
人生就像一场马拉松,跑的最快的未必是笑到最后的!
4楼2013-06-25 10:59:26
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