应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切连接
51/1返回列表
查看: 776  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切连接

新手提问
xho1和sac1的双酶切问题：从T载体和表达载体分别用这两种酶双酶切，回收T载体的酶切目的片段，连接到表达载体的相应的酶切位点上，16度过夜，热击转化，过夜跳单克隆，pcr验证，有目的片段，但是提取质粒酶切没有目的片段，pcr共检测出近20个单菌落是这种情况了，但都切不出目的片段，请问我该怎么办？？？急急急
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-24 14:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-06-25 20:25:26
提取的质粒为模板也是有目的条带的，我现在都不知道怎么办好了，干脆去测序得了，这是我目前的想法...

嘿嘿。。。楼主太认真了。。。我们构建好了以后挑单克隆、摇菌后直接拿去测序的，发证测序又不贵，就20元左右。。。不过楼主的认真态度值得学习。。。
赞一下 回复此楼
keepon
7楼2013-06-25 21:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
33ggdf(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:52:27
33ggdf: 金币+2, ★有帮助 2013-06-26 15:38:40
目的片段多大？验证的有多大？提的质粒浓度多大？酶切是否定量了？时间是否过少或过长?少了切不开，多了星活性。。建议从这几点改进。。祝顺利
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-24 18:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
33ggdf(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:52:34
我们一般4度过夜，我觉得是没有连上，菌液PCR有不一定代表你连上了，有可能菌液里面本身就有这个基因，如果是提出的质粒为模板PCR的话应该就没有目的条带吧。
赞一下 回复此楼
keepon
3楼2013-06-25 08:40:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-24 18:16:33
目的片段多大？验证的有多大？提的质粒浓度多大？酶切是否定量了？时间是否过少或过长?少了切不开，多了星活性。。建议从这几点改进。。祝顺利

pcr的片段和目的片段一样大小，我有设置的对照。酶切体系50微升，含20微升质粒。酶切时间为三小时。您看有什么地方不妥吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-25 20:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +10 RichLi_ 2026-03-25 10/500 2026-03-26 02:17 by BruceLiu320
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +14 tcxiaoxx 2026-03-20 16/800 2026-03-25 23:14 by peike
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料求调剂 +4 .m.. 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:30 by peike
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +3 小鱼爱有机 2026-03-25 3/150 2026-03-25 20:13 by qingfeng258
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭