24小时热门版块排行榜    

查看: 852  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切连接

新手提问
xho1和sac1的双酶切问题:从T载体和表达载体分别用这两种酶双酶切,回收T载体的酶切目的片段,连接到表达载体的相应的酶切位点上,16度过夜,热击转化,过夜跳单克隆,pcr验证,有目的片段,但是提取质粒酶切没有目的片段,pcr共检测出近20个单菌落是这种情况了,但都切不出目的片段,请问我该怎么办???急急急
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-06-25 20:25:26
提取的质粒为模板也是有目的条带的,我现在都不知道怎么办好了,干脆去测序得了,这是我目前的想法...

嘿嘿。。。楼主太认真了。。。我们构建好了以后挑单克隆、摇菌后直接拿去测序的,发证测序又不贵,就20元左右。。。不过楼主的认真态度值得学习。。。
keepon
7楼2013-06-25 21:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
33ggdf(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-26 12:52:27
33ggdf: 金币+2, 有帮助 2013-06-26 15:38:40
目的片段多大?验证的有多大?提的质粒浓度多大?酶切是否定量了?时间是否过少或过长?少了切不开,多了星活性。。建议从这几点改进。。祝顺利
2楼2013-06-24 18:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
33ggdf(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-26 12:52:34
我们一般4度过夜,我觉得是没有连上,菌液PCR有不一定代表你连上了,有可能菌液里面本身就有这个基因,如果是提出的质粒为模板PCR的话应该就没有目的条带吧。
keepon
3楼2013-06-25 08:40:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-24 18:16:33
目的片段多大?验证的有多大?提的质粒浓度多大?酶切是否定量了?时间是否过少或过长?少了切不开,多了星活性。。建议从这几点改进。。祝顺利

pcr的片段和目的片段一样大小,我有设置的对照。酶切体系50微升,含20微升质粒。酶切时间为三小时。您看有什么地方不妥吗?
4楼2013-06-25 20:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 21/1050 2026-08-07 14:23 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +22 布布和一二 2026-08-06 45/2250 2026-08-07 14:14 by 日月天地
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +23 低垂的野花 2026-07-31 31/1550 2026-08-07 12:22 by speculiar
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 基金中了 +11 laoda193707 2026-08-06 11/550 2026-08-07 10:54 by TT和NN
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +4 archvillain 2026-08-06 8/400 2026-08-07 08:06 by 带你看大海
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见