应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切连接
51/1返回列表
查看: 779  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切连接

新手提问
xho1和sac1的双酶切问题：从T载体和表达载体分别用这两种酶双酶切，回收T载体的酶切目的片段，连接到表达载体的相应的酶切位点上，16度过夜，热击转化，过夜跳单克隆，pcr验证，有目的片段，但是提取质粒酶切没有目的片段，pcr共检测出近20个单菌落是这种情况了，但都切不出目的片段，请问我该怎么办？？？急急急
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-24 14:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
33ggdf(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:52:34
我们一般4度过夜，我觉得是没有连上，菌液PCR有不一定代表你连上了，有可能菌液里面本身就有这个基因，如果是提出的质粒为模板PCR的话应该就没有目的条带吧。
赞一下 回复此楼
keepon
3楼2013-06-25 08:40:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
33ggdf(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:52:27
33ggdf: 金币+2, ★有帮助 2013-06-26 15:38:40
目的片段多大？验证的有多大？提的质粒浓度多大？酶切是否定量了？时间是否过少或过长?少了切不开，多了星活性。。建议从这几点改进。。祝顺利
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-24 18:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-24 18:16:33
目的片段多大？验证的有多大？提的质粒浓度多大？酶切是否定量了？时间是否过少或过长?少了切不开，多了星活性。。建议从这几点改进。。祝顺利

pcr的片段和目的片段一样大小，我有设置的对照。酶切体系50微升，含20微升质粒。酶切时间为三小时。您看有什么地方不妥吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-25 20:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-06-25 08:40:51
我们一般4度过夜，我觉得是没有连上，菌液PCR有不一定代表你连上了，有可能菌液里面本身就有这个基因，如果是提出的质粒为模板PCR的话应该就没有目的条带吧。

提取的质粒为模板也是有目的条带的，我现在都不知道怎么办好了，干脆去测序得了，这是我目前的想法
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-25 20:25:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +14 tcxiaoxx 2026-03-20 16/800 2026-03-25 23:14 by peike
[考研] 275求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:32 by barlinike
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 材料277求调剂 +4 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 15:29 by fch1983
[考研] 281求调剂 +4 Koxui 2026-03-24 5/250 2026-03-25 11:38 by userper
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +7 天天好运来上岸� 2026-03-24 7/350 2026-03-24 20:26 by peike
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭