8楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:25:17
是TAKARA的HS高保真酶，后来我又用普通的Taq酶加尾，回收之后涂板没长出菌落······...

11楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-22 11:50:02
TAKARA HS 没有A 尾巴只能用于blunt 末端连接载体，例如pJET1.2。确认下你用的新酶是不是有尾巴...

12楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-24 15:41:10
嗯，谢谢。还想问问，除了这个情况，还有什么原因可能引起我现在的问题呢？我想逐个排除~...

13楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-26 09:16:13
看看T4酶活性，抗生素是否正确...

8楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:25:17
是TAKARA的HS高保真酶，后来我又用普通的Taq酶加尾，回收之后涂板没长出菌落······...

15楼: Originally posted by 山毛榉树 at 2013-10-13 14:57:34
现在这个问题你解决了么，我也遇到了类似的问题，好伤心。。。...

16楼: Originally posted by hellohuo at 2013-10-14 17:17:39
没有，估计还是和做实验的经验有关吧，我的师姐做就没啥问题，你可以找个师兄师姐一起做，看看，如果结果差不多，那么就要看是不是感受态的问题。还有一个原因就可能是抗生素的量多少的问题~...

17楼: Originally posted by 山毛榉树 at 2013-10-15 17:11:38
我原来用20微升的感受态，现在用50微升的感受态细胞；用的DNA也是立即回收就连接上，16度连接过夜，复苏的时候摇床的转速慢一点。我改了这些条件，今天早上观察平板就有菌落长出来了，希望能对你有帮助。...

18楼: Originally posted by hellohuo at 2013-10-16 10:23:27
呵呵，谢谢，我试试~...