24小时热门版块排行榜    

查看: 3894  |  回复: 21

dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-06-26 12:37:24
引用回帖:
8楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:25:17
是TAKARA的HS高保真酶,后来我又用普通的Taq酶加尾,回收之后涂板没长出菌落······...

TAKARA HS 没有A 尾巴只能用于blunt 末端连接载体,例如pJET1.2。确认下你用的新酶是不是有尾巴
★穷则独善其身,达则兼济天下★
11楼2013-06-22 11:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-22 11:50:02
TAKARA HS 没有A 尾巴只能用于blunt 末端连接载体,例如pJET1.2。确认下你用的新酶是不是有尾巴...

嗯,谢谢。还想问问,除了这个情况,还有什么原因可能引起我现在的问题呢?我想逐个排除~
12楼2013-06-24 15:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-24 15:41:10
嗯,谢谢。还想问问,除了这个情况,还有什么原因可能引起我现在的问题呢?我想逐个排除~...

看看T4酶活性,抗生素是否正确
★穷则独善其身,达则兼济天下★
13楼2013-06-26 09:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-26 09:16:13
看看T4酶活性,抗生素是否正确...

好的,谢谢~
14楼2013-07-02 10:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山毛榉树

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:25:17
是TAKARA的HS高保真酶,后来我又用普通的Taq酶加尾,回收之后涂板没长出菌落······...

现在这个问题你解决了么,我也遇到了类似的问题,好伤心。。。
时间紧迫
15楼2013-10-13 14:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 山毛榉树 at 2013-10-13 14:57:34
现在这个问题你解决了么,我也遇到了类似的问题,好伤心。。。...

没有,估计还是和做实验的经验有关吧,我的师姐做就没啥问题,你可以找个师兄师姐一起做,看看,如果结果差不多,那么就要看是不是感受态的问题。还有一个原因就可能是抗生素的量多少的问题~
16楼2013-10-14 17:17:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山毛榉树

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hellohuo: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-16 10:23:46
引用回帖:
16楼: Originally posted by hellohuo at 2013-10-14 17:17:39
没有,估计还是和做实验的经验有关吧,我的师姐做就没啥问题,你可以找个师兄师姐一起做,看看,如果结果差不多,那么就要看是不是感受态的问题。还有一个原因就可能是抗生素的量多少的问题~...

我原来用20微升的感受态,现在用50微升的感受态细胞;用的DNA也是立即回收就连接上,16度连接过夜,复苏的时候摇床的转速慢一点。我改了这些条件,今天早上观察平板就有菌落长出来了,希望能对你有帮助。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

时间紧迫
17楼2013-10-15 17:11:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellohuo

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by 山毛榉树 at 2013-10-15 17:11:38
我原来用20微升的感受态,现在用50微升的感受态细胞;用的DNA也是立即回收就连接上,16度连接过夜,复苏的时候摇床的转速慢一点。我改了这些条件,今天早上观察平板就有菌落长出来了,希望能对你有帮助。...

呵呵,谢谢,我试试~
18楼2013-10-16 10:23:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by hellohuo at 2013-10-16 10:23:27
呵呵,谢谢,我试试~...

载体连了目的片段的大小 是自连载体的差不多两倍 你可以拿自连的载体做阴性对照嘛 连了目的片段的跑的慢一些
19楼2014-06-25 10:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amy4115

新虫 (初入文坛)

楼主的问题解决了吗?找到原因了吗?我现在遇到的问题和你一样,目的基因也是3-4k,和载体大小差不多,转化涂板后长的很少,而且都是空载体
20楼2014-10-05 15:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hellohuo 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 7/350 2026-08-25 03:24 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见