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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-06-26 12:37:24
引用回帖:
8楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:25:17
是TAKARA的HS高保真酶,后来我又用普通的Taq酶加尾,回收之后涂板没长出菌落······...

TAKARA HS 没有A 尾巴只能用于blunt 末端连接载体,例如pJET1.2。确认下你用的新酶是不是有尾巴
★穷则独善其身,达则兼济天下★
11楼2013-06-22 11:50:02
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hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-22 11:50:02
TAKARA HS 没有A 尾巴只能用于blunt 末端连接载体,例如pJET1.2。确认下你用的新酶是不是有尾巴...

嗯,谢谢。还想问问,除了这个情况,还有什么原因可能引起我现在的问题呢?我想逐个排除~
12楼2013-06-24 15:41:10
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-24 15:41:10
嗯,谢谢。还想问问,除了这个情况,还有什么原因可能引起我现在的问题呢?我想逐个排除~...

看看T4酶活性,抗生素是否正确
★穷则独善其身,达则兼济天下★
13楼2013-06-26 09:16:13
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hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-26 09:16:13
看看T4酶活性,抗生素是否正确...

好的,谢谢~
14楼2013-07-02 10:55:08
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山毛榉树

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:25:17
是TAKARA的HS高保真酶,后来我又用普通的Taq酶加尾,回收之后涂板没长出菌落······...

现在这个问题你解决了么,我也遇到了类似的问题,好伤心。。。
时间紧迫
15楼2013-10-13 14:57:34
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hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 山毛榉树 at 2013-10-13 14:57:34
现在这个问题你解决了么,我也遇到了类似的问题,好伤心。。。...

没有,估计还是和做实验的经验有关吧,我的师姐做就没啥问题,你可以找个师兄师姐一起做,看看,如果结果差不多,那么就要看是不是感受态的问题。还有一个原因就可能是抗生素的量多少的问题~
16楼2013-10-14 17:17:39
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山毛榉树

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hellohuo: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-16 10:23:46
引用回帖:
16楼: Originally posted by hellohuo at 2013-10-14 17:17:39
没有,估计还是和做实验的经验有关吧,我的师姐做就没啥问题,你可以找个师兄师姐一起做,看看,如果结果差不多,那么就要看是不是感受态的问题。还有一个原因就可能是抗生素的量多少的问题~...

我原来用20微升的感受态,现在用50微升的感受态细胞;用的DNA也是立即回收就连接上,16度连接过夜,复苏的时候摇床的转速慢一点。我改了这些条件,今天早上观察平板就有菌落长出来了,希望能对你有帮助。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

时间紧迫
17楼2013-10-15 17:11:38
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hellohuo

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by 山毛榉树 at 2013-10-15 17:11:38
我原来用20微升的感受态,现在用50微升的感受态细胞;用的DNA也是立即回收就连接上,16度连接过夜,复苏的时候摇床的转速慢一点。我改了这些条件,今天早上观察平板就有菌落长出来了,希望能对你有帮助。...

呵呵,谢谢,我试试~
18楼2013-10-16 10:23:27
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by hellohuo at 2013-10-16 10:23:27
呵呵,谢谢,我试试~...

载体连了目的片段的大小 是自连载体的差不多两倍 你可以拿自连的载体做阴性对照嘛 连了目的片段的跑的慢一些
19楼2014-06-25 10:59:55
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amy4115

新虫 (初入文坛)

楼主的问题解决了吗?找到原因了吗?我现在遇到的问题和你一样,目的基因也是3-4k,和载体大小差不多,转化涂板后长的很少,而且都是空载体
20楼2014-10-05 15:16:16
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