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hellohuo

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因· 已有1人参与

克隆基因，用PMD19-T载体，天根的感受态细胞，进行转化，可是涂板之后，菌落少，测的序列全是空载体，求教：会是哪些原因导致的？我的目的基因片段大概3-4K左右，是不是和片段大小有关？
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1楼 2013-06-19 15:39:50
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:37:24
引用回帖:
8楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:25:17
是TAKARA的HS高保真酶，后来我又用普通的Taq酶加尾，回收之后涂板没长出菌落······...

TAKARA HS 没有A 尾巴只能用于blunt 末端连接载体，例如pJET1.2。确认下你用的新酶是不是有尾巴
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
11楼2013-06-22 11:50:02
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hellohuo(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:07:53
3~4K是有点大，最好是16℃过夜。
做蓝白筛选，减少假阳性。
感受态也会有影响，可以做一个阳性对照。
赞一下 回复此楼
每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-19 16:06:17
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hellohuo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-19 16:06:17
3~4K是有点大，最好是16℃过夜。
做蓝白筛选，减少假阳性。
感受态也会有影响，可以做一个阳性对照。

感受态也会有影响吗？还有一个问题，就是如果抗生素加的会多一些，对菌落的形成是不是也有一定的影响？
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3楼2013-06-19 16:58:47
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:08:02
你的Taq酶是什么牌子，p产物有A 尾巴吗？
还有就是检查你的T4酶，是否活性足够高。
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2013-06-19 17:03:22
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