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lmcyjxs金虫 (正式写手)
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[求助]
大牛来指点下啊~CDS区到底含不含内含子？看了相关的帖反而把我搞糊涂了
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各位大侠，我要崩溃了，不是说我没之前没看过帖，而是看了帖之后把我搞混了。 1 CDS区到时含不含内含子？有一个老师说不含，一个说含，我看了论坛，两种说法我都好像看过。我认为是不含的。 2 如果CDS区不含内含子，有些基因在NCBI里查到的，标题上注明是全长CDS区，但下面的注释里却显示含有很多个CDS区，基因序列也显示含有多个CDS区，如图1，难道CDS区真含有内含子才是正解？但为什么我克隆了一个基因，反转录得到的，不含内含子了，获得的基因就跟图1情况一样，终止密码子还更多，导致多个CDS区存在，怎么会这样呢？如图2 3 若在一个基因序列里，含有多个CDS区（就是在多个不同位置含终止密码子），连接到表达载体是不是指翻译其识别的第一个CDS？  1.jpg  2.jpg |
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lmcyjxs
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您好！谢谢您的耐心和热心帮助！我对第一个解决路线不是很理解，是反转录后，用特异性上游引物和Oligo（dT）引物来做PCR扩增，然后，将此RT-PCR产物克隆至克隆载体，测序初步表明是目的产物后再同时用特异性上游引物和下游引物，以T-载体和目的基因的重组质粒为模版扩增吗？以Oligo(dT)来做下游引物扩增的主要原理是怎样的啊？ 因为反转录的时候，已经有同时用到Oligo（dT）和Ramdom 6 mers引物了，理论上Oligo（dT）引物可以将mRNA调取出来，即反转录液里就算有DNA的污染，应该也会有cDNA存在而扩到不含内含子的CDS的，可是我的PCR产物里，只有含内含子的目的基因，在相应的位置上，不含内含子的CDS产物连个影都没有，我不是很理解。  |
27楼2013-06-23 10:57:38
laoshi0633
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2楼2013-06-14 16:27:25
laoshi0633
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3楼2013-06-14 16:31:36
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4楼2013-06-14 17:07:52
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