| 查看: 823 | 回复: 2 | ||||
[求助]
发酵液除菌体后清液蛋白如何分析？
|
| 酵母类发酵后，通过菌体分离，分离后发酵液很澄清，如何分析里面的蛋白成分，用什么方法或仪器设备呢？（盐的成分比较多） |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有298人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
qianshengguo
铜虫 (小有名气)
- 应助: 22 (小学生)
- 金币: 283.9
- 红花: 2
- 帖子: 113
- 在线: 48.5小时
- 虫号: 1455411
- 注册: 2011-10-22
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2013-06-09 11:26:16
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 应助指数+1, 很详细 2013-06-09 21:41:18
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 应助指数+1, 很详细 2013-06-09 21:41:18
|
盐比较多，就先用分子筛层析把盐去掉。质谱和二维电泳都可以高效地确定样品中的全部或者接近全部的蛋白质成分。质谱可以直接测定其中的各种成分的分子量，然后从数据库中搜索对应的成分，不需要提纯样品！ 如果你是想针对某种蛋白质成分研究，那么就要先提纯，然后分析鉴定。 鉴定三级结构和四级结构，不要用晶体衍射，很多时候单晶体根就做不出来！ 一级结构的测定我就不说了，基于Ediman降解的自动测序仪测序不难，费用也不是很高。当然，可以用串联质谱或者Ladder Sequencing的质谱测序，如果你们真的非常有钱的话而且愿意如此去花费的话。 首先要保证三级结构和四级结构的分子量与标准品一样，可以直接用MS测定四级结构蛋白质的分子量，这比用电泳和层析精确且方便。而后可以使用肽谱分析，以前酶切割走电泳，现在酶切后用质谱测定各个水解片段的相对分子量是否与数据库中的信息吻合。 而后用红外傅里叶变换光谱测定样品的二级结构的种类是否符合标准品，再用对比两者的紫外光谱和荧光光谱，大致可以比较出两者的三级结构是否相同。有条件的话，可以用圆二色光谱比较样品和标准品的典型的二级结构的数量的比例是否形同，需要相应的软件处理圆二色光谱数据。 做完以上工作后，在保证了分子量相同的前提下，最简单的三级结构和四级结构的鉴定方法就是测定蛋白质的功能，如果功能活性很强，那么综合前面的信息蛋白质很可能就是目的蛋白质。 |
3楼2013-06-09 21:31:50
