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发酵液除菌体后清液蛋白如何分析？
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| 酵母类发酵后，通过菌体分离，分离后发酵液很澄清，如何分析里面的蛋白成分，用什么方法或仪器设备呢？（盐的成分比较多） |
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qianshengguo
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2楼2013-06-09 11:26:16
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+2, 应助指数+1, 很详细 2013-06-09 21:41:18
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kx444555: 金币+2, 应助指数+1, 很详细 2013-06-09 21:41:18
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盐比较多，就先用分子筛层析把盐去掉。质谱和二维电泳都可以高效地确定样品中的全部或者接近全部的蛋白质成分。质谱可以直接测定其中的各种成分的分子量，然后从数据库中搜索对应的成分，不需要提纯样品！ 如果你是想针对某种蛋白质成分研究，那么就要先提纯，然后分析鉴定。 鉴定三级结构和四级结构，不要用晶体衍射，很多时候单晶体根就做不出来！ 一级结构的测定我就不说了，基于Ediman降解的自动测序仪测序不难，费用也不是很高。当然，可以用串联质谱或者Ladder Sequencing的质谱测序，如果你们真的非常有钱的话而且愿意如此去花费的话。 首先要保证三级结构和四级结构的分子量与标准品一样，可以直接用MS测定四级结构蛋白质的分子量，这比用电泳和层析精确且方便。而后可以使用肽谱分析，以前酶切割走电泳，现在酶切后用质谱测定各个水解片段的相对分子量是否与数据库中的信息吻合。 而后用红外傅里叶变换光谱测定样品的二级结构的种类是否符合标准品，再用对比两者的紫外光谱和荧光光谱，大致可以比较出两者的三级结构是否相同。有条件的话，可以用圆二色光谱比较样品和标准品的典型的二级结构的数量的比例是否形同，需要相应的软件处理圆二色光谱数据。 做完以上工作后，在保证了分子量相同的前提下，最简单的三级结构和四级结构的鉴定方法就是测定蛋白质的功能，如果功能活性很强，那么综合前面的信息蛋白质很可能就是目的蛋白质。 |
3楼2013-06-09 21:31:50
