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sw07

金虫 (正式写手)

[求助] 质谱响应低

做生物样品时,负离子模式,峰面积很小,条件已经优化过了,100ng时才3位数面积,不知道什么原因
三糖苷类物质,分子量比较大~~
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小草宅客

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加点氨水 低浓度的试试
不卑不亢
2楼2013-06-08 10:54:17
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caicaiseven

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的esi源嘛?你做的这类化合物适合用esi源嘛?会不会APCI更好一点?
3楼2013-06-08 15:43:20
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xiaohu7223

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sw07: 金币+10 2013-06-09 12:45:02
你给出的线索太粗糙。是MRM模式还是 SIM模式? 峰面积小,信噪比高也是很好的响应啊。负离子模式就是不如正离子模式响应好。四极杆质谱会有高质量歧视现象,你只说你的分子量大,是多大呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-06-08 23:21:58
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sw07

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaohu7223 at 2013-06-08 23:21:58
你给出的线索太粗糙。是MRM模式还是 SIM模式? 峰面积小,信噪比高也是很好的响应啊。负离子模式就是不如正离子模式响应好。四极杆质谱会有高质量歧视现象,你只说你的分子量大,是多大呢?
...

MRM模式,信噪比还可以,800的分子量~
5楼2013-06-09 12:44:51
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gigigu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sw07: 金币+10 2013-06-10 10:19:14
三糖苷类物质,本来就不大容易做,除了—OH以外,可能结构式中也没有多少杂原子,所以ESI负离子应该是对的,只是不知道你用的是什么型号的仪器,可否选择灵敏度高一些的仪器,如果是入门级的四级杆有可能也只能是这样的灵敏度了。
建议是,
1调整流动相,流动相中加点氨水,可以加2mM醋酸铵缓冲盐和0.05%的氨水试试,
2调整梯度,尽量使峰又细又高
3了解仪器性能状态也很重要,因为很多人由于长期使用的是正离子模式,所以负离子长时间不校准,这个时候可能需要校准一下。如果你方法的噪音很低,可以尝试将Q3分辨率改成low试一下,看看灵敏度有没有提高
4优化离子源参数和位置,有时候不见得喷雾电压越高越好,需要自己尝试和优化,另外温度和气流以及离子源的位置优化好了也有可能帮助你提高2-3倍的信号
5另外偶尔增大进样量,样品预处理进行样品富集,这些都可以尝试
6楼2013-06-09 15:14:03
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阳光部落

金虫 (小有名气)

这个可能是离子化程度比较低的缘,试试尽量使离子化过程在流动相中产生,所以在流动相中注意PH(缓冲液或三乙胺等)
7楼2013-06-09 22:47:51
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xiaohu7223

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sw07 at 2013-06-09 12:44:51
MRM模式,信噪比还可以,800的分子量~...

八百的分子量不算大,我们也做过这么大分子量的药,负离子不如正离子响应好,一方面是离子化效率的问题,一方面是Q2中裂解后的碎片没有对负电荷相对稳定的容纳能力,这表现在打纯品的时候二级碎片丰度不高或不稳定。

理论上加氨,但是能做负离子都是些羟基羧基类的化合物,加氨后就会在死体积出峰,而死体积在反向体系中是强极性物质的出峰时间,基质效应干扰什么的都很厉害。

同样,要把保留时间后延,就得加酸,但是有的化合物加酸后负离子响应下降的很厉害,但是色谱峰拖尾,还得加酸,这就是一个矛盾。我看回帖里说用梯度,这是个好办法,峰细,检出限高。

找个好点的质谱,工欲善其事,必先利其器
8楼2013-06-10 09:41:36
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sw07

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaohu7223 at 2013-06-10 09:41:36
八百的分子量不算大,我们也做过这么大分子量的药,负离子不如正离子响应好,一方面是离子化效率的问题,一方面是Q2中裂解后的碎片没有对负电荷相对稳定的容纳能力,这表现在打纯品的时候二级碎片丰度不高或不稳定 ...

很奇怪,流动相中加氨,反而响应降低了
9楼2013-06-10 10:18:31
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xiaohu7223

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by sw07 at 2013-06-10 10:18:31
很奇怪,流动相中加氨,反而响应降低了...

理论上是正离子加酸,负离子加氨。但是需要实践,理论不是万能的,你的这个问题我没有遇见过,不好回答
10楼2013-06-10 18:35:29
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