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sherrysure银虫 (小有名气)
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[求助]
我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
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这3个月一直在做蛋白表达， 但是一直没有成功。 我是这样做的： 把扩增出来的目的条带连接到pMD18TSimple，转化到Top10； 选择PCR与测序鉴定结果都正确的阳性菌液，提质粒，酶切，回收目的条带； 酶切后目的条带连接到pET30a载体，转化到Rosetta； 菌液PCR和测序鉴定结果正确的阳性菌液扩大培养，在0、2、4、6、8h取样做SDS-PAGE； 得到的结果就是没有结果  期间也试过以下表达载体：pET28b、pET30a、pET32a 选择的酶切位点是BamHI、XhoI，都对应载体图谱数过，不会存在移码的问题。 分别也都尝试过感受态：BL21、Rosetta 但是结果都是不表达，跑出来与上面类似的图 迫切寻求帮助，请求高手指导~~感激不尽！  page.jpg [ Last edited by sherrysure on 2013-6-6 at 14:47 ] |
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 核酸生物学实验经验 | 蛋白质生物学实验经验 |
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pengyun2521
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31楼2013-06-12 08:10:15