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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » 现在国际上流行哪种多糖测定方法
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cynthia8225

新虫 (小有名气)

[交流] 现在国际上流行哪种多糖测定方法

如题，现在想检测胞外多糖的含量，但是在查找文献时发现有醇沉后用苯酚硫酸法测定的，也有直接测定EPS干重的，还有其他一些方法，可是到底哪种方法比较好呢？
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libocpu

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1楼 2013-06-06 09:26:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

蓝龙教主

金虫 (正式写手)
★ ★
豆哥: 金币+2, 谢谢参与 2013-06-08 08:22:45
引用回帖:
4楼: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-06 15:36:29
就是在沉淀胞外多糖的时候，有人要除蛋白以后再进行测定，可是由于样品较多，每个都透析感觉不实际。。。所以不知道怎么办了。。。还有为什么直接测定不可能呢？...

我个人认为，多糖本身就是个混合物，只能说大概是什么样的~~要精确测量，必须做到：1.采用标准品为该组分多糖，分子量已知，链接方式已知，由多少单糖组成已知，这样才可以；2.苯酚硫酸法是采用了葡萄糖或者其他单糖测定的，但是多糖本身的复杂性，包括多糖在酸性条件下水解后，也同样有吸收，当你的样品是混合物时候，你如何确定多糖的含量？
透析也是个粗分的办法，因为目前也没有特别好的方法；要不然还装柱子呗~~这个东西，反正国内做的好的没几个，不是我们不努力，而是有些问题，确实存在，就不好解决。
我再提一个问题，多糖的纯度如何测定？
你想清楚这个问题的话，就明白为什么多糖含量没办法测定了
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5楼2013-06-06 16:12:02
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蓝龙教主

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 21:45:43
正解。。。。确实如此呢。。。再请教个问题，为什么有的多糖是用水溶测定，有的是用氢氧化钠呢？有什么说法不？我是做的灵芝多糖，所以看到很多子实体多糖测定的时候是水提，但是到菌丝阶段就变成氢氧化钠了。。。 ...

多糖分为酸性多糖与中性多糖，主要是里面可能含有糖醛酸类所致。
采用氢氧化钠提就是最大限度提取，但是酸碱性太强会导致多糖结构改变，我前面做分离的时候，用碱提，然后加乙酸沉淀酸性糖再分离。
这样其实也有问题，有研究表明，酸性糖活性较好，但是我做结构的时候分离出去了酸性糖，做的比较粗。
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cynthia8225
15楼2013-06-08 16:50:00
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libocpu

木虫 (小有名气)
★ ★
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
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xiaoxiao270: 金币+1 2013-06-13 17:12:05
这个我觉得是看你做什么用了，侧重点在哪里了。
如果侧重于提取工艺的优化，需要测定的样品很多，有时候干重也可以接受，硫酸苯酚法会更理想。
如果做胞外多糖的结构、性质研究，最好还是脱蛋白，制备精制品后，进一步测定。
好运！
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8楼2013-06-07 11:25:48
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蓝龙教主

金虫 (正式写手)
★ ★
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
PSA: 金币+1, 谢谢 2013-06-06 15:41:36
好像没有专门的，个人感觉苯酚硫酸就行，但是要换算，直接测定不可能~~
仔细想想问什么
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3楼2013-06-06 11:19:59
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cynthia8225

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝龙教主 at 2013-06-06 11:19:59
好像没有专门的，个人感觉苯酚硫酸就行，但是要换算，直接测定不可能~~
仔细想想问什么

就是在沉淀胞外多糖的时候，有人要除蛋白以后再进行测定，可是由于样品较多，每个都透析感觉不实际。。。所以不知道怎么办了。。。还有为什么直接测定不可能呢？
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4楼2013-06-06 15:36:29
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syhorchid

木虫之王 (文学泰斗)
★ ★
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
xiaoxiao270: 金币+1 2013-06-13 17:12:00
一般采用缩合比色测定
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6楼2013-06-06 20:09:22
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天天2016

银虫 (正式写手)
★
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
我也快要做这个了， 很快，一起交流
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7楼2013-06-07 08:28:03
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cynthia8225

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by libocpu at 2013-06-07 11:25:48
这个我觉得是看你做什么用了，侧重点在哪里了。
如果侧重于提取工艺的优化，需要测定的样品很多，有时候干重也可以接受，硫酸苯酚法会更理想。
如果做胞外多糖的结构、性质研究，最好还是脱蛋白，制备精制品后，进 ...

就是现在我在做基因表达对多糖产量是否有影响，这样的话是否是直接称重也可以呢？有个老师说硫酸苯酚法干扰太大了。。他们现在用称重法，但是我查了些文献，称重法还不是主流，但是已经有了。。。所以现在迷茫了。。。
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9楼2013-06-07 14:40:33
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cynthia8225

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 蓝龙教主 at 2013-06-06 16:12:02
我个人认为，多糖本身就是个混合物，只能说大概是什么样的~~要精确测量，必须做到：1.采用标准品为该组分多糖，分子量已知，链接方式已知，由多少单糖组成已知，这样才可以；2.苯酚硫酸法是采用了葡萄糖或者其他单 ...

我不是要知道多糖的组成，可能后期可能做其中单糖组分是否有变化，不过现在仍然处在基因表达对多糖产量的影响方面。。。。
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10楼2013-06-07 14:51:42
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蓝龙教主

金虫 (正式写手)
★
xiaoxiao270: 金币+1 2013-06-13 17:12:12
引用回帖:
10楼: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 14:51:42
我不是要知道多糖的组成，可能后期可能做其中单糖组分是否有变化，不过现在仍然处在基因表达对多糖产量的影响方面。。。。...

我个人觉得我们有些时候想走捷径，结果到最后才发现自己认为的捷径不是捷径~~
多糖含量没有办法直接定量，称重，无非就是浸膏重量，本来就是很粗的方法，如何精确测定呢？
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11楼2013-06-07 15:02:25
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cynthia8225

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 蓝龙教主 at 2013-06-07 15:02:25
我个人觉得我们有些时候想走捷径，结果到最后才发现自己认为的捷径不是捷径~~
多糖含量没有办法直接定量，称重，无非就是浸膏重量，本来就是很粗的方法，如何精确测定呢？...

正解。。。。确实如此呢。。。再请教个问题，为什么有的多糖是用水溶测定，有的是用氢氧化钠呢？有什么说法不？我是做的灵芝多糖，所以看到很多子实体多糖测定的时候是水提，但是到菌丝阶段就变成氢氧化钠了。。。。差距好大呀。。。。
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12楼2013-06-07 21:45:43
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耿骥

金虫 (小有名气)
★
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
4楼: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-06 15:36:29
就是在沉淀胞外多糖的时候，有人要除蛋白以后再进行测定，可是由于样品较多，每个都透析感觉不实际。。。所以不知道怎么办了。。。还有为什么直接测定不可能呢？...

sevage法除蛋白。
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13楼2013-06-08 08:39:42
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neu234

木虫之王 (文学泰斗)
★
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
看一下这方面权威专家的文章再确定
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16楼2013-06-09 08:49:14
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cynthia8225

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 蓝龙教主 at 2013-06-08 16:50:00
多糖分为酸性多糖与中性多糖，主要是里面可能含有糖醛酸类所致。
采用氢氧化钠提就是最大限度提取，但是酸碱性太强会导致多糖结构改变，我前面做分离的时候，用碱提，然后加乙酸沉淀酸性糖再分离。
这样其实也有 ...

那碱提取的多糖是不是基本都包括了呢？其实我做的不需要这么细。。。只要能鉴定多糖产量的变化就可以了呢。。。呵呵
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17楼2013-06-13 17:04:34
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chong//虫

铜虫 (小有名气)
★
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
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9楼: Originally posted by cynthia8225 at 2013-06-07 14:40:33
就是现在我在做基因表达对多糖产量是否有影响，这样的话是否是直接称重也可以呢？有个老师说硫酸苯酚法干扰太大了。。他们现在用称重法，但是我查了些文献，称重法还不是主流，但是已经有了。。。所以现在迷茫了。 ...

称重法是计算多糖得率的，就是醇沉后的干重与原料的比值。苯酚硫酸法是测多糖的含量的，用标准葡萄糖做标准曲线，紫外检测，好像两种方法不一样，具体我也不是很懂，我也要快做这一方面了，还希望大家能够提出宝贵意见！
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18楼2013-06-13 18:14:55
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cynthia8225

新虫 (小有名气)
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19楼2013-06-13 21:10:11
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看你行不行

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by 蓝龙教主 at 2013-06-08 16:50:00
多糖分为酸性多糖与中性多糖，主要是里面可能含有糖醛酸类所致。
采用氢氧化钠提就是最大限度提取，但是酸碱性太强会导致多糖结构改变，我前面做分离的时候，用碱提，然后加乙酸沉淀酸性糖再分离。
这样其实也有 ...

请问碱提多糖是酸性的还是碱性的呢？我看有的文献上说碱提有助于酸性多糖的溶出，好多碱提都没明确说明糖的酸碱性，求解！
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21楼2013-11-21 14:55:22
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蓝龙教主

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by 看你行不行 at 2013-11-21 14:55:22
请问碱提多糖是酸性的还是碱性的呢？我看有的文献上说碱提有助于酸性多糖的溶出，好多碱提都没明确说明糖的酸碱性，求解！...

多糖的酸碱性跟其中的糖醛酸有关，碱提的肯定是酸性跟中性的。一般都用的是氢氧化钠溶液
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22楼2013-11-23 00:00:17
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readytogo2楼
2013-06-06 09:55   回复  
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
泡泡-21114楼
2013-06-08 10:16   回复  
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
yingying158820楼
2013-06-13 22:11   回复  
cynthia8225(金币+1): 谢谢参与
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