| 查看: 830 | 回复: 5 | |||
[交流]
一道非常考基本功的题。
|
|
在某主页上看见一堆分子生物学的题，好考基本功啊！ 这题看了答案也没想明白，各位看看题讨论讨论。 It is possible to obtain mutations in plasmid encoded genes by mutagenizing the purified plasmid DNA in vitro (for example, with hydroxylamine) then transforming the plasmid DNA into recipient cells. Given a plasmid that encodes ampicillin resistance (AmpR), chloramphenicol resistance (CamR), and B-galactosidase (lacZ), how would you use this approach to isolate single mutations in the lacZ gene? Be sure to describe any genetic selections and/or screens used. [Hint: you will need a way of measuring the relative amount of mutagenesis to ensure a reasonable probability that the lacZ mutants are due to a single mutation.] ANSWER: Mutagenize the purified plasmid DNA in vitro with hydroxylamine. Move the plasmid into a lacI- lacZ+ lacY+ host (by transformation or electroporation of the plasmid DNA), selecting for chloramphenicol resistance. Screen the cells for (i) AmpR and (ii) repression of lacZ (for example, by screening for X-gal- in the absence of an inducer such as lactose or IPTG). In several independent experiments, quantitate the extent of mutagenesis by plotting the number of Amps mutants and the number of LacI- mutants vs time of exposure to the mutagen. The results will indicate the number of cells that have a mutation in both genes (i.e. at least two hits) compared to the number of cells that have a mutation in only one gene (i.e. at least one hit). These results can be plugged into the Poisson distribution to determine the probability of 0, 1, and >1 hit per gene for each time point. Choose colonies from time points where the probability of >1 hit per gene is rare. [ Last edited by 1949stone on 2013-6-6 at 08:08 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有165人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 你不得不知道的托福考试“潜规则”
已经有8人回复
- 考研福利！ 2014考研数学必看 张宇各种答疑解惑！
已经有5人回复
- 名校硕士生谈考研捷径【转】
已经有3人回复
- 【转载】（转载）面试86.4，姐我终于上岸啦~~~小三翻盘！
已经有27人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
【招聘】温州医科大学/附属医院/瓯江实验室李校堃院士团队诚聘博士后和科研人员
+1/187
-
南宁师范大学贺益苗课题组2026年招收有机化学和材料与化工专业拟招生4-5名硕士研究生
+1/184
-
南方医科大学中药学院 调剂硕士生一名 中药学专业
+1/82
-
焊接专业应届毕业生招聘
+1/81
-
五邑大学池振国教授团队2026年大量接收化学化工材料背景考研生
+5/80
-
欢迎报考赣南师范大学智能制造与未来能源学院
+2/52
-
沈阳工业大学-环境电化学技术研究团队-招收硕士研究生
+3/51
-
烟台大学精准材料高等研究院26年材料方向研究生招生
+1/32
-
北京理工大学-化学与化工学院-招收2026级博士生 [申请-考核制]
+1/25
-
南京林业大学化工院有机合成方向硕士招调剂
+1/9
-
同济大学环境学院 肖倩特聘研究员课题组 招聘硕士/博士（长期有效）
+1/6
-
中国科大化学与材料科学学院/苏州高等研究院 刘东/熊宇杰教授研究团队诚聘博士后(助理
+1/6
-
中国科学院上海硅酸盐研究所招聘科研助理（纳米材料与生物应用方向）
+1/5
-
中国地质大学（武汉）清洁能源与资源循环团队诚招科研助理/2026级硕士、博士生/博士后
+1/4
-
上海交通大学陈倩栎课题组招收2026年申请-考核博士生1名（能源材料方向）
+1/4
-
招收从事大气复合污染成因领域研究生
+1/3
-
5科大招收材料专业硕士
+1/2
-
香港中文大学（深圳）张舵课题组招生-高分子功能材料、智能/仿生材料、生物材料方向
+1/2
-
福建师范大学环境与资源学院2026级学硕专硕调剂（网络远程面试）
+1/2
-
苏州高校招收08方向调剂
+1/1
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2013-06-06 11:38:11
3楼2013-06-06 12:00:16
4楼2013-06-06 22:59:16
5楼2013-06-07 10:48:57
6楼2013-06-07 12:15:15
