| 查看: 898 | 回复: 5 | |||
[交流]
一道非常考基本功的题。
|
|
在某主页上看见一堆分子生物学的题，好考基本功啊！ 这题看了答案也没想明白，各位看看题讨论讨论。 It is possible to obtain mutations in plasmid encoded genes by mutagenizing the purified plasmid DNA in vitro (for example, with hydroxylamine) then transforming the plasmid DNA into recipient cells. Given a plasmid that encodes ampicillin resistance (AmpR), chloramphenicol resistance (CamR), and B-galactosidase (lacZ), how would you use this approach to isolate single mutations in the lacZ gene? Be sure to describe any genetic selections and/or screens used. [Hint: you will need a way of measuring the relative amount of mutagenesis to ensure a reasonable probability that the lacZ mutants are due to a single mutation.] ANSWER: Mutagenize the purified plasmid DNA in vitro with hydroxylamine. Move the plasmid into a lacI- lacZ+ lacY+ host (by transformation or electroporation of the plasmid DNA), selecting for chloramphenicol resistance. Screen the cells for (i) AmpR and (ii) repression of lacZ (for example, by screening for X-gal- in the absence of an inducer such as lactose or IPTG). In several independent experiments, quantitate the extent of mutagenesis by plotting the number of Amps mutants and the number of LacI- mutants vs time of exposure to the mutagen. The results will indicate the number of cells that have a mutation in both genes (i.e. at least two hits) compared to the number of cells that have a mutation in only one gene (i.e. at least one hit). These results can be plugged into the Poisson distribution to determine the probability of 0, 1, and >1 hit per gene for each time point. Choose colonies from time points where the probability of >1 hit per gene is rare. [ Last edited by 1949stone on 2013-6-6 at 08:08 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有153人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 你不得不知道的托福考试“潜规则”
已经有8人回复
- 考研福利！ 2014考研数学必看 张宇各种答疑解惑！
已经有5人回复
- 名校硕士生谈考研捷径【转】
已经有3人回复
- 【转载】（转载）面试86.4，姐我终于上岸啦~~~小三翻盘！
已经有27人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
南京大学医学院附属鼓楼医院 肿瘤疫苗与纳米医学团队 博士后招聘
+1/91
-
课题组招推免硕士和直博生。华中科技大学光电学院发光材料与器件团队。
+1/84
-
上海交通大学周宝文课题组招收2027年申请考核制博士研究生
+1/83
-
2027级博士研究生——质谱分析
+5/80
-
香港城市大学分子电子学方向招收2027年夏季和秋季入学博士生
+1/45
-
招岩土工程科研博士后，基本薪酬一年40万+，另根据论文与项目贡献发放奖励
+1/29
-
重庆大学招岩土工程科研博士后，基本薪酬一年40万+，另据论文与项目发放奖励
+1/20
-
以色列理工-生物质、塑料等催化转化2-3名---全奖博士研究生（随时入学）和科研助理
+1/19
-
评职称需要，卖发明专利了:D有技术储备需求的设备厂商可联系
+1/18
-
天津大学浙江研究院2026年第二批招聘公告：高分子等方向特聘青年研究员/博士后
+1/16
-
神经生物学，基础医学，科研助理招聘
+1/15
-
山东大学-山东字节信息智能技术实验室2026年招聘博士后
+2/12
-
新加坡国立大学Sibudjing Kawi教授课题组招聘博士后（热催化/等离子体催化方向）
+1/8
-
浙大城市学院功能材料工程研究中心诚聘海内外英才
+1/7
-
深圳理工大学罗伟课题组招收博士研究生-第一性原理-机器学习-铁电-拓扑方向（1名）
+1/6
-
石蜡切片VS冰冻切片：哪种更适合免疫荧光检测？
+1/6
-
新加坡国立大学Sibudjing Kawi教授课题组part-time PhD（热催化/等离子体催化方向）
+1/5
-
深圳大学岩土多场耦合课题组-长期招聘研究生、博士后、专职研究人员
+1/4
-
苦寻-西安交通大学统计学同学
+1/2
-
【科研诚信】武汉轻工大学何江玲3篇论文：涉嫌抄袭、成组数据重复、制造虚假显著
+1/2
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2013-06-06 11:38:11
3楼2013-06-06 12:00:16
4楼2013-06-06 22:59:16
5楼2013-06-07 10:48:57
6楼2013-06-07 12:15:15