应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一篇基因克隆的文章，审稿人提出这样的问题，请求大牛指点回答
51/1返回列表
查看: 1905  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zmclk

银虫 (小有名气)

[求助] 一篇基因克隆的文章，审稿人提出这样的问题，请求大牛指点回答

Without the availability of a genome, the authors cannot guarantee that the primers are gene-specific. They might amplify isoforms, close duplicates or SNP isoforms that cannot be distinguished by general qPCR.
我克隆出序列全长后，设计引物做Real-time PCR，审稿人说我的引物不是特异性的，我该怎么回答呢？

[ Last edited by zmclk on 2013-6-5 at 09:41 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-05 09:40:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmclk

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 547star at 2013-06-05 12:35:38
基因组未知，无法确定引物是特异的，当进行定量PCR的时候，不能区分isoforms, close duplicates or SNP isoforms 。这样一来，从你的定量PCR结果无法推出可靠的结论。你要证明做定量PCR的引物是特异的，能区分SNP亚 ...

那如何证明定量PCR的引物是特异的呢？？
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-05 16:23:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zmclk(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:34:36
审稿人问的是你调取基因的时候使用的是PCR扩增的方法，是在你已知基因的序列设计的。那么审稿人的顾虑或疑问是如果是一个全新的基因，没有可用的同源基因，那么这个方法还能就不那么通用了！所以你需要回答的是告诉审稿人你的方法是否具有一般性，还是就回答你的方法就是用来在已有一定序列信息的前提下使用的。
所以一般文章结尾不要说太泛泛的言语。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-06-05 10:33:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmclk

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-06-05 10:33:07
审稿人问的是你调取基因的时候使用的是PCR扩增的方法，是在你已知基因的序列设计的。那么审稿人的顾虑或疑问是如果是一个全新的基因，没有可用的同源基因，那么这个方法还能就不那么通用了！所以你需要回答的是告诉 ...

我是在获得全长的基因序列基础上，设计的特异性引物，进行Real-time PCR，为什么就不能保证specificity呢？
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-05 11:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-08 12:06:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmclk at 2013-06-05 11:27:15
我是在获得全长的基因序列基础上，设计的特异性引物，进行Real-time PCR，为什么就不能保证specificity呢？...

审稿人的意思是，你全基因组序列未知，然后你克隆出了该基因，你基于该基因序列设计引物做realtime PCR，你怎么保证该基因在该基因组中没有近似的duplicate，因为如果基因组序列已知的话，做个简单的比对就可以
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-06-05 11:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +10 关忆北. 2026-04-09 11/550 2026-04-12 00:45 by xuxiang
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-11 7/350 2026-04-11 23:48 by baobaoye
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 346，工科0854求调剂，专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 吉大计算机技术331分，英语六级，求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 一志愿京区985，085401，与本科专业一致，电子信息工程， +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 362求调剂 +10 我要考大 2026-04-06 14/700 2026-04-10 17:00 by luoyongfeng
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +8 bradoner 2026-04-08 9/450 2026-04-09 13:43 by only周
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 专硕0854初试考材科基，求调剂 +7 3220548044 2026-04-06 10/500 2026-04-08 21:59 by hypershenger
[考研] 材料科学与工程320求调剂，080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 本科生物信息学，总分362 求07 08调剂 +6 q小倩1210 2026-04-06 6/300 2026-04-07 19:40 by macy2011
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 319求调剂 +3 handrui 2026-04-05 3/150 2026-04-06 09:33 by jp9609
[考研] 085500机械专硕初试288求调剂 +3 GZJguo666- 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:06 by jkddd
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭