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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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houyuanming

金虫 (初入文坛)

[交流] RT-PCR中的反转录cDNA的内参怎么做呢?

我在做反转录cDNA的时候将cdna测量浓度是1000ng/ul,琼脂糖凝胶检测有弥散条带,我使用的是promaga的试剂盒,是否这样也可能没有反转录成功,内参怎么做呢,请指教详细一些,还有我将cdna进行pcr扩增就是不出条带,已经试验了快2个月了,退火温度也在梯度试验,不过无论改进什么都是不出条带,什么都没有,一般来说RT-PCR这一步骤出条带不应该是难点的呀 ?请各位高手指教
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llaall_123

顶,我也是啊,不出条带。RNA提取时,没有降解。都不知道是不是反转录出了问题,可是又不知道怎么鉴定反转录是否成功。
2楼2008-09-01 20:28:54
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
逆转录完的cDNA跑琼脂糖其实很难看清的
我建议,最好用文献上的内参引物和条件试一下,把循环数提高再降低退火温度
JBC一类的杂志都会列出内参的引物序列和PCR条件的
3楼2008-09-01 20:35:29
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赵敏9565

铁虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
你要考虑你的内参引物是否有问题?PCR条件是否有问题等!
再加一个阳性对照,比如其他人使用没问题的cDNA或者基因组DNA!
4楼2008-09-01 21:18:14
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shs304

金虫 (正式写手)

可能是引物不对吧
5楼2008-09-02 09:10:39
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