24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 716  |  回复: 4
当前主题已经存档。

houyuanming

金虫 (初入文坛)

[交流] RT-PCR中的反转录cDNA的内参怎么做呢?

我在做反转录cDNA的时候将cdna测量浓度是1000ng/ul,琼脂糖凝胶检测有弥散条带,我使用的是promaga的试剂盒,是否这样也可能没有反转录成功,内参怎么做呢,请指教详细一些,还有我将cdna进行pcr扩增就是不出条带,已经试验了快2个月了,退火温度也在梯度试验,不过无论改进什么都是不出条带,什么都没有,一般来说RT-PCR这一步骤出条带不应该是难点的呀 ?请各位高手指教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llaall_123

顶,我也是啊,不出条带。RNA提取时,没有降解。都不知道是不是反转录出了问题,可是又不知道怎么鉴定反转录是否成功。
2楼2008-09-01 20:28:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
逆转录完的cDNA跑琼脂糖其实很难看清的
我建议,最好用文献上的内参引物和条件试一下,把循环数提高再降低退火温度
JBC一类的杂志都会列出内参的引物序列和PCR条件的
3楼2008-09-01 20:35:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赵敏9565

铁虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
你要考虑你的内参引物是否有问题?PCR条件是否有问题等!
再加一个阳性对照,比如其他人使用没问题的cDNA或者基因组DNA!
4楼2008-09-01 21:18:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shs304

金虫 (正式写手)

可能是引物不对吧
5楼2008-09-02 09:10:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 houyuanming 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 0703一志愿9,初试成绩:338,四六级已过,有科研经历,求调剂! +3 Zuhui0306 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:09 by shangxh
[考研] 317求调剂 +5 十闲wx 2026-03-24 5/250 2026-03-27 13:48 by 杨杨杨紫
[考研] 一志愿吉大071010,316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 10/500 2026-03-26 22:37 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见