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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关免疫组化试剂及时间的问题
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意萧02

木虫 (正式写手)

[求助] 有关免疫组化试剂及时间的问题

我做的是大鼠卵巢的免疫组化，请问在免疫组化中：
（1）过氧化氢这一步大家都用几分钟？
（2）BSA药品的配置能用多久，大家是如何保存的？免疫组化中封闭的时间呢？
（3）一抗孵育过程中要怎么的效果才设置确定浓度？最好附图，谢谢。
（4）DAB显色水冲洗时间大概多少？
谢谢各位大神指导！小弟不胜感激。
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1楼 2013-06-04 15:29:04
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
意萧02(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-04 18:09:46
意萧02: 金币+1, ★有帮助, 有帮助，谢谢 2013-06-05 19:51:52
（1）过氧化氢30min
（2）BSA最好现用现配，不过4°保存个1周问题不大，免疫组化封闭可以37°两个小时或者4°过夜，感觉4°过夜效果好些
（3）这个问题没听明白
（4）DAB显色一般是2-5min，不过建议时间不要太长，避免背景太深
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3楼2013-06-04 16:46:38
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华农夏田

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
意萧02(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-04 18:09:36
意萧02: 金币+2, ★有帮助, 有两个回复，另一个回复的满意些。 2013-06-05 19:51:22
我是这样做的：过氧化氢30min,BSA自带,30min,一抗浓度时间自己摸索吧，DAB看棕黄色背景立即停止反应，当然时间把握因实验而异。
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要科研也要生活
2楼2013-06-04 16:23:09
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意萧02

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-04 16:46:38
（1）过氧化氢30min
（2）BSA最好现用现配，不过4°保存个1周问题不大，免疫组化封闭可以37°两个小时或者4°过夜，感觉4°过夜效果好些
（3）这个问题没听明白
（4）DAB显色一般是2-5min，不过建议时间不要太长 ...

第三问是说：设置的一抗的浓度时，我们一般不是都先做一个梯度看看那个浓度比较适合吗？所以我想问该按怎么样的效果设置浓度？
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4楼2013-06-05 19:49:56
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 意萧02 at 2013-06-05 19:49:56
第三问是说：设置的一抗的浓度时，我们一般不是都先做一个梯度看看那个浓度比较适合吗？所以我想问该按怎么样的效果设置浓度？...

奥 你们是这样做啊 我们一般是利用经验 如果抗体效果不是很好 我们稀释500倍，效果好我们一般稀释1000倍
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意萧02
5楼2013-06-06 11:41:40
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